共刺激分子B7-H3、B7-H4和ILT4在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的研究.pdf

1、原發(fā)性肺癌在許多工業(yè)化國家是主要的癌癥死亡原因，其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占75～80％，并且用常規(guī)療法很難治愈。為了尋求治療NSCLC的新方法，首先需要闡明腫瘤的發(fā)生機(jī)制。免疫反應(yīng)的缺陷可以促進(jìn)腫瘤的生長，糾正異常免疫是免疫治療的一條途徑。本研究采用RT-PCR和FACS流式細(xì)胞儀等方法對B7-H3、B7-H4和ILT4在人的肺腺癌細(xì)胞株(A549、H1299、H23、Wark)、人的肺鱗癌細(xì)胞株(U1752)和人的肺癌大細(xì)胞株(

2、U1810)中的mRNA和蛋白表達(dá)進(jìn)行了分析； RT-PCR擴(kuò)增的片斷用2％的GTG瓊脂糖凝膠分離和獲取，并將其克隆和測序；Z采用免疫組化檢測B7-H3、B7-H4和ILT4在NSCLC病人肺癌組織中的表達(dá)水平，分析它們的表達(dá)與臨床參數(shù)之間的關(guān)系。更重要的是，也分析了B7-H3、B7-H4和ILT4在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)水平與腫瘤浸潤型淋巴細(xì)胞間的關(guān)系，為闡明非小細(xì)胞肺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供了新的理論，為臨床肺癌的診斷、防治和新藥開發(fā)

3、尋找新的靶目標(biāo)提供了理論根據(jù)。 一、關(guān)于B7-H3和B7-H4主要有以下發(fā)現(xiàn) 1.人肺癌細(xì)胞株中B7-H3和B7-H4 mRNA的表達(dá) 通過RT-PCR發(fā)現(xiàn)，6種肺癌細(xì)胞株都表達(dá)B7-H3 mRNA；然而，B7-H4轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物僅在A549細(xì)胞株中表達(dá)，其它細(xì)胞株不表達(dá)。 2．人肺癌細(xì)胞株膜表面B7-H3和B7-H4蛋白的表達(dá) 通過FACS分析發(fā)現(xiàn)，這些細(xì)胞株的細(xì)胞膜表面均表達(dá)B7-H3，

4、且平均熒光強(qiáng)度很高；但所有的細(xì)胞株上均檢測不到B7-H4的表達(dá)。 3．一個(gè)新的B7-H4 mRNA的剪接形式通過RT-PCR和瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞株A549的B7-H4有兩條帶，其中一條501bp的短帶在正常外周血和單核細(xì)胞源性樹突狀細(xì)胞中沒有出現(xiàn)。將其克隆并測序?；驇焯峁┢湫蛄袛?shù)據(jù)，其存取碼為：Bankit729346。根據(jù)人B7-H4(CCDS：894.1)，501bp的短帶是由B7-H4 mRNA的一個(gè)剪接形式所產(chǎn)生

5、的，它缺乏編碼Ig C結(jié)構(gòu)域的CDS3，命名為dv-B7-H4。 4．B7-H3和B7-H4在人NSCLC標(biāo)本中的表達(dá) 在多數(shù)標(biāo)本中，B7-H3和B7-H4兩種分子在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)形式是彌漫性的。細(xì)胞膜和/或胞漿內(nèi)均有表達(dá)。病灶中浸潤性淋巴細(xì)胞不表達(dá)B7-H3和B7-H4。 70例標(biāo)本中，B7-H3陽性占37.1％(26/70)；B7-H4陽性42.9％(30/70)。B7-H3和B7-H4的表達(dá)呈明顯的正相關(guān)

6、性(R<'2>=0.419；p<0.0001)。 5．NSCLC標(biāo)本中B7-H3和B7-H4的表達(dá)與TILs的相關(guān)性 在26例B7-H3陽性標(biāo)本中，TILs的數(shù)量為23.41±16.84，而44例B7-H3陰性表達(dá)標(biāo)本中，TILs為33.98±14.55，兩者相比，有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.0081)。另外，B7-H4陽性標(biāo)本的TILs為23.93±13.36，明顯低于B7-H4陰性標(biāo)本中的TILs(33.17±16.

7、29，p=0.0174)。 6.B7-H3和B7-H4的表達(dá)與臨床參數(shù)的相關(guān)性 B7-H3或B7-H4的表達(dá)強(qiáng)度與臨床參數(shù)之間的關(guān)系：鱗癌組B7-H3陽性的比例(44.7％，17/38)高于腺癌組(28.1％，9/32)；腺癌組B7-H4陽性占50％(16/32)，鱗癌組占36.8％(14/38)；但統(tǒng)計(jì)學(xué)上均無顯著性差異。沒發(fā)現(xiàn)其它因素(年齡、性別、吸煙史或分化程度)與B7-H3或B7-H4的表達(dá)有關(guān)。 在有淋

8、巴結(jié)轉(zhuǎn)移的56例標(biāo)本中，21例高表達(dá)B7-H3，23例高表達(dá)B7-H4。在14例未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中，僅1例高表達(dá)B7-H3，1例高表達(dá)B7-H4。B7-H3或B7-H4的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高度有關(guān)(p分別=0.046，0.023)。 二、關(guān)于ILT4主要有以下發(fā)現(xiàn)： 1．ILT4 mRNA在肺癌細(xì)胞株中的表達(dá) 通過RT-PCR發(fā)現(xiàn)，6種肺癌細(xì)胞株中，有三種細(xì)胞株：H1299、A549和U1810，表達(dá)ILT4

9、 mRNA，其它細(xì)胞株不表達(dá)。 2．ILT4蛋白在肺癌細(xì)胞株上的表達(dá) FACS分析結(jié)果提示，僅有兩個(gè)細(xì)胞株：H1299和A549的膜表面表達(dá)ILT4。 3．ILT4在NSCLC標(biāo)本中的表達(dá) 免疫組化結(jié)果提示，正常肺組織不表達(dá)ILT4，ILT4在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)形式是散在的，在細(xì)胞膜和/或胞漿內(nèi)都有表達(dá)，病灶周圍的漿細(xì)胞和部分纖維母細(xì)胞也有表達(dá)。 40例NSCLC標(biāo)本中，ILT-4陽性表達(dá)1

10、4例，占35.5％，ILT4在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)與其臨床參數(shù)包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。 4．ILT4的表達(dá)與TILs的相關(guān)性 在14例ILT4陽性標(biāo)本中，TILs的數(shù)量為26.82±20.22，而26例ILT4陰性表達(dá)標(biāo)本中，TILs為37.11±14.35，兩者相比，有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)。 總之，B7-H3、B7-H4和ILT4在NSCLC組織中表達(dá)，它們的表達(dá)強(qiáng)度與TILs的浸潤呈負(fù)