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1、梨黑斑病是梨樹主要病害之一,也是廣泛發(fā)生的世界性病害之一。在亞洲國(guó)家發(fā)病嚴(yán)重,在梨進(jìn)出口貿(mào)易中已受到進(jìn)口國(guó)的嚴(yán)密注視。為有效防治梨黑斑病,解決生產(chǎn)問題,本文研究了梨黑斑病病原茵(Alternaria alternata Japanese pear pathotvpe)的生物學(xué)特性及遺傳多樣性、病菌致病力分化,不同梨品種對(duì)該病的抗性評(píng)價(jià),篩選了離體條件下對(duì)病原菌有拮抗作用的生防菌株Bacillus subtilis B-916離子注入突變
2、體E-29和能較好抑制病原菌生長(zhǎng)的化學(xué)藥劑嘧霉胺,篩選了E-29和嘧霉胺復(fù)配的最佳配比,并進(jìn)一步測(cè)定了復(fù)配劑對(duì)梨黑斑病的田間防治效果。整個(gè)研究結(jié)論如下: (1)2003年在江蘇省農(nóng)科院園藝所梨園采集梨黑斑病病葉,經(jīng)分離、培養(yǎng)和鑒定,獲得24個(gè)梨黑斑病病原菌菌株。 測(cè)定了24個(gè)梨黑斑病病原菌菌株的生物學(xué)特性,結(jié)果表明:不同菌株在PSA平板上培養(yǎng),其生長(zhǎng)學(xué)特性(平均目生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量、菌落顏色以及菌落厚度)有顯著不同。病原菌
3、生長(zhǎng)最適溫度為28℃,孢子萌發(fā)的最適溫度為28℃;病原菌最適生長(zhǎng)相對(duì)濕度為98~100%,孢子萌發(fā)必須具備相對(duì)濕度98%以上的高濕條件,在水滴中萌發(fā)率最高;病原菌菌絲最適生長(zhǎng)pH值為7~8,孢子萌發(fā)最適pH值為7~8,病原菌培養(yǎng)一段時(shí)間后培養(yǎng)基的pH值會(huì)發(fā)生改變。該病原菌對(duì)多種單糖、雙糖和多糖等碳源及有機(jī)氮、無機(jī)氮均可利用,最適碳源為蔗糖,最適氮源為蛋白胨,硫酸胺和氯化胺會(huì)抑制病原菌菌絲生長(zhǎng)。 在人工培養(yǎng)條件下,隨時(shí)間推移,鏈格
4、孢菌的產(chǎn)孢性狀、菌落性狀會(huì)發(fā)生變化。用CTAB法提取了24個(gè)菌株的DNA,并用特異引物擴(kuò)增出18個(gè)菌株序列,對(duì)其中8個(gè)菌株的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,聚類分析發(fā)現(xiàn)鏈格孢8個(gè)菌株間存在遺產(chǎn)變異。 測(cè)定了24個(gè)梨黑斑病病原菌菌株的致病性,結(jié)果表明:在24個(gè)菌株中強(qiáng)致病力菌株占20.8%,中等致病力菌株占70.8%,弱致病力菌株占8.3%。比較發(fā)現(xiàn)2005年噴霧法接種和涂抹法接種所測(cè)定的菌株致病力相關(guān)性較高為69.69%。另外,我們還比較了
5、菌株的致病性與菌絲生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量以及菌落顏色的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)菌株的致病性與菌絲生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量相關(guān)性不顯著,相關(guān)系數(shù)分別為30.05%和7%:但是與菌落顏色存在一定的正相關(guān),顏色越深,致病性越強(qiáng)。 (2)田間自然鑒定和人工接種鑒定了不同梨品種對(duì)黑斑病的抗性,結(jié)果表明:無論是田間自然鑒定還是田間接種鑒定,華酥、黃花、早酥、豐水抗病性最強(qiáng),占供試品種的25%;愛宕、金水2號(hào)抗病性最弱,占供試品種的12.5%。在田間自然條件下的某些高
6、抗、中抗、感病品種,在人工接種條件下則分別表現(xiàn)為抗性、感病、高感品種。不同品種在接種病菌后對(duì)病菌的抗擴(kuò)展能力不同:華酥、黃花、早酥、豐水抗擴(kuò)展能力最強(qiáng);富源黃、愛宕、金水2號(hào)、七月酥抗擴(kuò)展能力最弱。 (3)室內(nèi)離體條件下測(cè)定了209株枯草芽孢桿菌離子注入體和28種化學(xué)藥劑對(duì)梨黑斑病病原菌的抑制作用,篩選出生防菌株E-29和化學(xué)藥劑嘧霉胺對(duì)梨黑斑病有較好的抑制力,進(jìn)一步篩選測(cè)定,選擇E-29與嘧霉胺復(fù)配,得到二者最佳配比為3.33×10<
7、'10>cfu/mlE-29:13.33%嘧霉胺=2:1,按此配比制得復(fù)配劑。 (4)田間小區(qū)試驗(yàn)中復(fù)配劑對(duì)梨黑斑病的防治效果較好,防治效果為45.9-66.5%,平均防效為54.1%;嘧霉胺對(duì)梨黑斑病病害的防治效果為52.9%;生防菌E-29對(duì)梨黑斑病病害的防治效果為23.6%。 藥劑處理中3.75g/1、4.5g/1復(fù)配劑中嘧霉胺的含量小于或等于單劑嘧霉胺的使用量,但對(duì)梨黑斑病的防治效果好于單劑嘧霉胺,單劑E-29防治效果為23
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