線(xiàn)粒體蛋白C1ORF102調(diào)控鼻咽癌能量代謝的分子機(jī)制研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文線(xiàn)粒體蛋白C1F102調(diào)控鼻咽癌能量代謝的分子機(jī)制研究姓名：向波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：疾病基因組學(xué)指導(dǎo)教師：李桂源20090501向波博士學(xué)位論文中文摘要程度表達(dá)。而在心臟、肝臟、脾臟、胃、腎臟、肺、結(jié)腸、胸腺、骨骼肌、胰腺以及表皮等組織中未檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá)。有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)，C10RFl02蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元中呈陽(yáng)性，在膠質(zhì)細(xì)胞中沒(méi)有表達(dá)。該結(jié)果說(shuō)明C10RFl02基因是一個(gè)新的組織特異性／選擇性基因。在研

2、究過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)C10RFl02基因存在第二外顯子選擇性剪切。C10RFl02基因全長(zhǎng)編碼389aa，選擇性剪切差異本編碼379aa，不包括第二外顯子。通過(guò)RTPCR結(jié)合測(cè)序的方法分析了C10RFl02基因全長(zhǎng)及剪切差異本在人胚胎組織及多種細(xì)胞系中的分布，結(jié)果表明，C10RFl02全長(zhǎng)(389aa)僅見(jiàn)于腦組織，而腦組織同時(shí)也表達(dá)編碼379aa的剪切本；鼻咽、氣管組織僅表達(dá)379aa剪切本；在永生化成人正常鼻咽上皮細(xì)胞系NP69及鼻咽癌細(xì)

3、胞系中表達(dá)的也是379aa差異本。前期研究發(fā)現(xiàn)在Hela細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染C10I江102表達(dá)質(zhì)粒，C10RFl02蛋白表達(dá)于線(xiàn)粒體。免疫熒光檢測(cè)表明NP69細(xì)胞中內(nèi)源性C10I強(qiáng)102蛋白與線(xiàn)粒體存在明顯共定位特征。隨后采用密度梯度離心方法分離NP69細(xì)胞線(xiàn)粒體和胞漿蛋白組分，Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性C10RFl02蛋白絕大部分定位于線(xiàn)粒體，且分子量較胞漿中的C10RFl02稍大，可能源于線(xiàn)粒體內(nèi)存在某種翻譯后修飾。上述結(jié)果表

4、明天然ClORFl02蛋白是一個(gè)線(xiàn)粒體蛋白。另外我們發(fā)現(xiàn)外源性穩(wěn)定表達(dá)的C10RFl02蛋白同樣主要定位于線(xiàn)粒體。免疫電鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)在58F細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mycC10RFl02蛋白定位于線(xiàn)粒體?！綜10RFl02在鼻咽癌中表達(dá)下調(diào)，轉(zhuǎn)染ClORFl02抑制5—8F細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖，逆轉(zhuǎn)5—8F細(xì)胞對(duì)缺氧的耐受能力】通過(guò)realtimeRTPCR、Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)C1ORF102基因mRNA及蛋白在鼻咽癌細(xì)胞系(HNEl、HNE