模擬皮膚發(fā)育構(gòu)建含附件組織工程皮膚的初步研究.pdf

1、目的:應(yīng)用刀片刮取法及酶消化法獲取胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，對(duì)獲得的表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定，并應(yīng)用獲得的表皮細(xì)胞作為種子細(xì)胞，PGA作為支架，初步構(gòu)建含附件組織工程皮膚，為胎鼠表皮細(xì)胞的多向分化潛能提供良好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，并力求獲得生物學(xué)性能更完整的組織工程皮膚，為臨床應(yīng)用提供更理想的生物修復(fù)材料。
　　方法:對(duì)刀片刮取法及酶消化法獲取的胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞，以角質(zhì)細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基(K-SFM)進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀

2、況及克隆形成情況，選擇Pan-CK多克隆抗體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定;對(duì)酶消化法獲取的胎鼠和小鼠成纖維細(xì)胞，以DMEM進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及克隆形成情況，選擇vimentin單克隆抗體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定;應(yīng)用培養(yǎng)的表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及PGA支架初步構(gòu)建組織工程皮膚，觀察形成皮膚及附件的情況。
　　結(jié)果:1.不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)觀察揭示了皮膚附件的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律，即在胚胎14.5天(embryo14.5天，E14.5天)時(shí)，雖

3、然表皮細(xì)胞僅為1-2層，但皮膚附件發(fā)育已經(jīng)開始，E16.5天時(shí)是皮膚附件發(fā)育最為旺盛的時(shí)期，E18.5天皮膚附件發(fā)育基本完成，生后7天(postnatal7，P7)時(shí)皮膚附件發(fā)育成熟。
　　2.應(yīng)用刀片刮取法能成功獲取E14.5天的胎鼠表皮細(xì)胞，并能建立穩(wěn)定的表皮細(xì)胞系。
　　3應(yīng)用酶消化法能分別獲取E16.5天，E18.5天，生后7天的胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞，并能建立穩(wěn)定的細(xì)胞系。
　　4.經(jīng)培養(yǎng)出的E14.

4、5天胎鼠表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和PGA支架構(gòu)建的組織工程皮膚，組織切片可見人造皮膚大體形態(tài)比較接近正常皮膚，表皮分層分化較完善，可見基底層、棘細(xì)胞層及角化層。
　　結(jié)論:1.通過(guò)對(duì)不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)的觀察，我們初步掌握了皮膚附件的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律。
　　2.刀片刮取法是一種獲取E14.5天的胎鼠表皮細(xì)胞較好的方法，可以得到數(shù)量較多，細(xì)胞活力較好的E14.5天的胎鼠表皮干細(xì)胞。
　　3.消化法是一種獲得E16.