用組織工程方法構(gòu)建SD大鼠全層皮膚的研究.pdf

1、近年來,隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展,研制人工皮膚替代物的研究報道逐漸增多.組織工程是目前生命科學領域的研究熱點,相關的研究涉及到各個方面.其核心是應用工程學的原理和方法與生命科學相結(jié)合,發(fā)展能恢復、保持或改善功能的生物替代品.該實驗運用組織工程學原理,成功在體外構(gòu)建了SD大鼠全層皮膚,實驗主要包括以下內(nèi)容：1.從SD仔鼠皮膚同時獲取角朊細胞和真皮成纖維細胞的多種方法的比較：為了簡便快捷的獲得大量最佳生長狀態(tài)的角朊細胞和真皮成纖維細胞以作為皮

2、膚組織工程的種子細胞.2.角朊細胞在三種不同培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)：配制FAD、MCDB153（-）、MCDB153（+）三種不同的培養(yǎng)基來培養(yǎng)SD大鼠的角朊細胞,通過細胞曲線、MTT檢測、流式細胞儀分析觀察細胞的生長狀態(tài).結(jié)果顯示細胞在無血清培養(yǎng)基中生長良好,而加入表皮生長因子和促進增殖的垂體提取物可以進一步改善細胞的生長狀態(tài).3.EGF對真皮成纖維細胞中cyclinD1和CDK-4表達的影響：用含100mL·L<'-1>胎牛血清的DME

3、M,加入50mg·L<'-1>的EGF培養(yǎng)SD大鼠的真皮成纖維細胞,通過MTT檢測、流式細胞儀分析觀察細胞的生長狀態(tài),免疫組化檢測cyclinD1和CDK-4的表達,結(jié)合流式細胞儀分析來觀察細胞的周期變化.4.三維立體培養(yǎng)中不同濃度的膠原對成纖維細胞生長的影響：分離1-2天SD仔鼠背部皮膚的成纖維細胞,分別種了6.4mg/ml,5.3mg/ml,4mg/ml的膠原中,光鏡觀察立體培養(yǎng)條件下成纖維細胞的生長狀態(tài)和細胞數(shù)量,并進行統(tǒng)計分析.

4、結(jié)果顯示6.4mg/ml的膠原濃度最適宜于成纖維細胞的生長.5SD大鼠全層組織工程皮膚的制備：分離SD仔鼠角朊細胞和成纖維細胞.6.bFGF和FN在同種異體組織工程皮膚促進大鼠皮膚缺損愈合中的表達：以新生SD大鼠皮膚的角朊細胞和真皮成纖維細胞構(gòu)建組織工程皮膚并將其移植到成年Wistar大鼠,通過HE染色、免疫組織化學方法對移植后不同時間的組織工程皮膚進行檢測,觀察創(chuàng)面愈合過程中bFGF、FN的表達變化及其與組織修復的關系.結(jié)果顯示bFG