膠質(zhì)瘤中Nanog基因5′非翻譯區(qū)表觀遺傳學(xué)修飾的檢測及意義.pdf

1、目的:檢測膠質(zhì)瘤組織中Nanog基因5′UTR的啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及組蛋白修飾的水平,并探討它們影響Nanog基因轉(zhuǎn)錄的可能機(jī)制和在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。為后續(xù)進(jìn)一步通過表觀遺傳學(xué)靶向調(diào)控Nanog影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)活性奠定基礎(chǔ)。
　　方法:(1)采用甲基化特異性 PCR(methylation specific pcr,MSP)分別檢測12例正常腦組織、51例膠質(zhì)瘤組織、22例膠質(zhì)瘤癌旁組織Nanog基因啟動子區(qū)甲基化狀

2、態(tài)。(2)使用無血清懸浮培養(yǎng)法獲得膠質(zhì)瘤干細(xì)胞并鑒定;并用 MSP檢測膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及U87細(xì)胞系Nanog基因啟動子區(qū)的甲基化程度。(3)實時定量PCR檢測相應(yīng)組織和細(xì)胞中Nanog表達(dá)情況。(4)Western blot檢測膠質(zhì)瘤及正常腦組織中H3ac及H3K9me3蛋白的表達(dá)。(5)染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)Real-time PCR技術(shù)檢測Nanog啟動子區(qū)域組蛋白H3

3、乙?；癏3K9甲基化水平。
　　結(jié)果:(1)膠質(zhì)瘤組織 Nanog啟動子區(qū)呈非甲基化狀態(tài),且非甲基化檢出率高于癌旁組織(χ2=14.852,P=0.000),且高級別膠質(zhì)瘤Nanog非甲基化程度高于低級別組。(2)U87細(xì)胞系成功分離獲得膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中Nanog非甲基化程度高于U87細(xì)胞系(t=6.988,P=0.000)。(3) Nanog mRNA在高級別膠質(zhì)瘤中的相對表達(dá)量高于低級別組,且膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中Nan

4、og mRNA相對表達(dá)量高于 U87細(xì)胞系。(4)膠質(zhì)瘤組織中 H3ac的表達(dá)量相對正常腦組織顯著增高（F=72.80,P=0.00),H3K9me3的表達(dá)量相對正常腦組織顯著下調(diào)(F=84.79,P=0.00);ChIP-Real-time PCR檢測膠質(zhì)瘤中Nanog基因啟動子區(qū)組蛋白H3乙?；礁哂谡ＤX組織(F=59.34,P=0.00),H3K9甲基化程度則低于正常腦組織(F=74.88,P=0.00)。
　　結(jié)論:膠