神經(jīng)顆粒素異位表達(dá)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制中的相關(guān)研究.pdf

1、目的：（1）建立可穩(wěn)定表達(dá)神經(jīng)顆粒素（Neurogranin，Ng）的細(xì)胞系，用于Ng表達(dá)對(duì)T細(xì)胞功能影響的體外研究，進(jìn)一步研究Ng在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮的作用。（2）研究神經(jīng)顆粒素（Neurogranin，Ng）在正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞與外周血T細(xì)胞的表達(dá)情況，確定是否可以用外周血單個(gè)核細(xì)胞Ng表達(dá)量來(lái)近似代替外周血T細(xì)胞Ng表達(dá)量,并進(jìn)一步明確Ng在T淋巴

2、細(xì)胞亞群的表達(dá)及定位。（3）比較Ng在SLE和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）中的表達(dá)情況，進(jìn)一步研究Ng在SLE中的表達(dá)是否具有特異性。
　　方法:（1）克隆人Ng基因，構(gòu)建和包裝可表達(dá)Ng的慢病毒轉(zhuǎn)染體系，感染Jurkat細(xì)胞，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證目的基因的表達(dá)。（2）收集正常人外周血60ml，淋巴細(xì)胞分離液提取外周血單個(gè)核細(xì)胞，利用流式細(xì)胞術(shù)分離得到CD4+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞，采用

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞與外周血T細(xì)胞Ng的表達(dá)情況。（3）收集SLE、RA患者的外周血，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證其外周血單個(gè)核細(xì)胞Ng基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)用表達(dá)Ng的慢病毒感染Jurkat細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證其可表達(dá)Ng基因。（2）正常人外周血T細(xì)胞與外周血單個(gè)核細(xì)胞的Ng表達(dá)量呈平行關(guān)系。（3）RA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞Ng表達(dá)量與SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞Ng表達(dá)量無(wú)明顯差異性。<