神經(jīng)顆粒素(Ng)異位表達與系統(tǒng)性紅斑狼瘡致病機制的相關性研究.pdf

1、目的：（1）通過構建綠色熒光蛋白標記的Ng過表達載體轉(zhuǎn)染HEK293T細胞來研究Ng的基本功能。（2）通過構建和包裝含有目的基因Ng的慢病毒感染Jurkat細胞來研究Ng對T淋巴細胞功能的影響，進而揭示神經(jīng)顆粒素在系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人中的致病機制。
　　方法：（1）用分子克隆技術構建綠色熒光蛋白標記的Ng真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-GFP-Ng，并轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，用western blot證實目的基因的表達、用IF明

2、確目的基因的細胞定位、用流式細胞儀檢測細胞凋亡、CCK8檢測細胞增殖。（2）構建和包裝表達Ng的慢病毒，感染Jurkat細胞，用western blot證實目的基因的表達、IF明確目的基因的細胞定位、流式細胞儀和DNA Ladder檢測細胞凋亡、CCK8檢測細胞增殖、ELISA檢測細胞因子IL-2和IFN-γ的表達水平、qPCR檢測Ng、CaMKII和CaMKIV mRNA水平的表達。
　　結果：（1）本課題構建了表達Ng的真核表