重組人ndrg2腺病毒抗膠質瘤體外藥效學評價.pdf

1、膠質瘤是原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的腫瘤類型,約占所有顱內腫瘤的45％。多形性膠質母細胞瘤是最常見的、惡性的星形膠質細胞瘤。盡管手術、放療和化療手段有所提高,病人的中位生存期卻無明顯增加。由于膠質瘤其浸潤性生長的特性,它和正常腦組織無明顯的分界,手術治療難以達到完全切除病灶的目的,因此常常會導致腫瘤的復發(fā)。常規(guī)的化學療法因血腦屏障和藥物抵抗等因素的影響,療效也不十分理想,因此腦膠質瘤預后很差。它具有病程短,進展快,生存期短,復發(fā)率高的特

2、點,病人從診斷到死亡平均生存期約12~18個月,五年存活率<10%。近年來隨著分子生物學實驗技術的不斷發(fā)展,利用基因治療膠質瘤成為了新的研究熱點。
　　目前分子靶向治療主要集中在以下四個方面:針對抑癌基因和原癌基因開發(fā)基因治療藥物來促進腫瘤細胞的凋亡;導入細胞毒性藥物來增強放化療的治療效果;導入血管形成抑制因子阻止腫瘤血管的生長和腫瘤細胞的侵襲;激活病人的免疫調節(jié)系統(tǒng)產生自身抗腫瘤效應并且防止腫瘤的復發(fā)。在抑癌基因研究方面腺病毒介

3、導的p53治療膠質瘤的I期臨床試驗中,Lang等人發(fā)現(xiàn):在所有的病人中,瘤內注射含p53的腺病毒載體都導致了p53基因的轉錄和功能性外源性p53的表達。其研究發(fā)現(xiàn)轉染了的細胞僅存在于注射部位附近,也就是說并沒有系統(tǒng)性的病毒播散。人ndrg2基因最早是由鄧艷春教授利用錨定引物從正常成人全腦cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)并克隆到的,于2000年1月被Genbank收錄,登錄號為AF159092。ndrg2有兩個亞型,即ndrg2L(基因全長2066bp

4、)和ndrg2S(基因全長2024bp),分別編碼371個氨基酸(41kDa)和357個氨基酸。這兩種NDRG2蛋白都屬于ABH超家族。
　　目前的研究顯示NDRG2可通過分子間的相互作用參與細胞的多種生物學功能,包括應激反應、分化、增殖和凋亡。它的表達與多種疾病相關聯(lián):在阿爾茨海默病人的腦組織中NDRG2蛋白質表達顯著提高;在老年性白內障患者的晶狀體上皮細胞中NDRG2的表達在mRNA水平和蛋白質水平也均有所上調。這提示NDRG

5、2可能與多種疾病的發(fā)生發(fā)展相關聯(lián)。NDRG2的表達降低還與多種腫瘤相關,例如乳腺癌、肝癌、胃癌、皮膚癌等。近期的多項實驗證明NDRG2在體外和體內通過調控各種不同的細胞因子來抑制腫瘤細胞的生長和侵襲,促進腫瘤細胞的凋亡。多種癌癥的不良預后與NDRG2的低表達相關。因此將ndrg2定位成一個抑癌基因,并將它看作是腫瘤預后判斷的生物標志。前期試驗中研究小組已經(jīng)成功構建了表達NDRG2長短兩個蛋白的重組腺病毒。膠質瘤細胞體外實驗證明,這二者均

6、有抑瘤作用,但二者在抑制腫瘤細胞生長、抗增殖、克隆形成能力并無顯著差異。為觀察該重組腺病毒的體外抗腦膠質瘤的藥效作用,本試驗選用了三株不同膠質瘤細胞株(人腦膠質瘤細胞A172、U251和SHG-44)進行體外藥效學試驗,并與同類藥物今又生(重組人p53腺病毒注射液)的療效進行比較,以期尋找其敏感細胞株及有效濃度,為下一步的體內藥效學評價提供理論依據(jù)。實驗首先擴增并純化了重組人ndrg2腺病毒(pAd-CMV/V5-DEST-ndrg2S

7、),western blot結果證明重組人ndrg2腺病毒感染的HEK293細胞能夠正確表達NDRG2蛋白。實驗檢測其TCID50/mL為:2.5×1010IU/ml。對三株膠質瘤細胞進行培養(yǎng),用western blot檢測其NDRG2表達;MTT法檢測重組人ndrg2腺病毒和今又生對這三株膠質瘤細胞的增殖抑制作用。
　　結果表明，三株膠質瘤細胞ndrg2均為低表達;重組人ndrg2腺病毒和今又生兩種藥物對三株膠質瘤細胞均表現(xiàn)出明

8、顯的增殖抑制作用,隨著病毒濃度的增大,其對細胞生長抑制作用增強。其中重組人ndrg2腺病毒和今又生對膠質瘤細胞A172和SHG-44的增殖抑制作用基本相同,在最大濃度1.68×1011v.p/ml時這二者對A172的抑制率接近100%;在膠質瘤細胞SHG-44中,在最大濃度1.68×1011v.p/ml下,重組人ndrg2腺病毒對其抑制率為73%,而今又生的抑制率為50%;對膠質瘤細胞U251的增殖抑制作用中,重組人ndrg2腺病毒抑制