紫花地丁及其常見(jiàn)混淆品的生藥學(xué)研究.pdf

1、目的:紫花地丁最早見(jiàn)于《備急千金要方》，具有清熱解毒，涼血消腫之功效。長(zhǎng)期以來(lái)，被冠以“地丁”之名者眾多，如“甜地丁”為豆科的小米口袋(GueIdenstaedtia pauciflora(Pall.) Fish.）;“苦地丁”為罌粟科紫堇（Corydalis edulis Maxim.）;“廣地丁”為龍膽科植物華南龍膽(Gentianialoureiri(D.Don) Griseb.）?！吨袊?guó)藥典》(2010年版)規(guī)定紫花地丁為堇菜科

2、堇菜屬植物紫花地丁(Violayedoensis Makino)。由于該屬多種植物外形以及地區(qū)性習(xí)慣用藥等原因，紫花地丁的品種比較混亂。全國(guó)常見(jiàn)的紫花地丁同屬混偽品有:早開(kāi)堇菜(V.prionantha Bunge)、東北堇菜(V.mandshuricaBeck.)、白花堇菜（V.patriniDC.）、戟葉堇菜(V.betonicifolia J.E.Smith)、尼泊爾堇菜(V.betonicifolia J.E.Smith sub

3、sp.Nepalensis(Ging)Beck.)、長(zhǎng)萼堇菜(V.inconspicua B1.)、犁頭草（V.concordifolia C.Wang.）等。由于堇菜屬分布廣種類(lèi)多，辨識(shí)難度極大，利用傳統(tǒng)的中藥鑒定手段很難進(jìn)行區(qū)分。ITS區(qū)在DNA的核心區(qū)域，一般不會(huì)受到物理?xiàng)l件的變化如藥材加工等而改變，已經(jīng)被大量應(yīng)用于各種基因水平的鑒別，效果較好，一般都能提供藥物的基本系統(tǒng)學(xué)信息。在本次關(guān)于紫花地丁鑒別的研究中，隨機(jī)選取了四川省三個(gè)

4、城市作為研究地點(diǎn)，并在隨機(jī)的原則下對(duì)三地的市場(chǎng)售地丁藥材的性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定以及基于ITS序列的分子鑒定，確定四川市場(chǎng)的地丁來(lái)源以及找到有效快捷的鑒定方法。
　　方法:(1)收集四川省成都、瀘州、自貢等3地9個(gè)藥房的紫花地丁藥材，對(duì)其進(jìn)行性狀鑒別;(2)利用顯微技術(shù)對(duì)9個(gè)樣品進(jìn)行顯微分析確定樣品的品種;(3)利用薄層色譜和熒光鑒別法對(duì)9個(gè)樣品做理化鑒定;(4)通過(guò)以上途徑判斷出四川省常見(jiàn)紫花地丁來(lái)源后，對(duì)紫花地丁與其同屬

5、易混材料，在DNA的ITS水平進(jìn)行序列分析，首先發(fā)現(xiàn)混偽品藥材與紫花地丁在ITS序列上的不同，然后再進(jìn)一步找出正品紫花地丁與偽品在ITS序列上最顯著的鑒別點(diǎn)。結(jié)果:(1)在形態(tài)鑒定中樣品1、樣品3、樣品5、樣品8性狀表現(xiàn)一致，后經(jīng)顯微以及理化鑒定均為正品紫花地丁;樣品2大部分為犁頭草;樣品4為心葉堇菜;樣品6為長(zhǎng)萼堇菜;樣品7大部分為長(zhǎng)萼堇菜，有少量正品紫花地丁，樣品9為正品紫花地丁與犁頭草的混合物。在顯微鑒定中樣品1、3、5、8、9表

6、現(xiàn)出相同的顯微特征;樣品2與樣品9的小部分顯微一致;樣品4具有獨(dú)自的顯微特征;樣品6與樣品7的大部分具有相同的顯微特征。在正品紫花地丁與其同屬的混偽品在薄層鑒別法中都表現(xiàn)出兩個(gè)相同熒光斑點(diǎn)。熒光鑒別中結(jié)果顯示紫花地丁、心葉堇菜以及以紫花地丁為主混有犁頭草的樣品顯亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn);犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、以長(zhǎng)萼堇菜為主混有少量紫花地丁的樣品顯藍(lán)色熒光樣品。四川藥房中常見(jiàn)的地丁來(lái)源有紫花地丁、長(zhǎng)萼堇菜、犁頭草、心葉堇菜等4種堇菜屬植物。(2)紫花地