廣西巴馬小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的檢測(cè)及分子生物學(xué)特性的研究.pdf

1、豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒(PERV)為反轉(zhuǎn)錄病毒科(Retroviridae)哺乳動(dòng)物C型反轉(zhuǎn)錄病毒屬(Mammalian Type C Retroviridae)成員，它是以前病毒DNA的形式整合進(jìn)豬細(xì)胞基因組中，并隨細(xì)胞染色體復(fù)制而復(fù)制。1997年，Patience等發(fā)現(xiàn)PERV在體外可以感染人的多種細(xì)胞，激起了人們對(duì)PERV與豬-人異種移植病原安全性的廣泛關(guān)注。 因此，篩選培育無PERV豬群，為異種移植提供安全可靠的供體源。本研

2、究利用國(guó)內(nèi)已建立的PERV檢測(cè)方法對(duì)廣西巴馬小型豬中PERV的存在情況進(jìn)行調(diào)查。共采集了114份外周血樣，通過PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：廣西巴馬小型豬基因組中普遍存在PERV，其陽性率達(dá)100％。其中以A亞型最高(91.4％)，其次為B亞型(87.7％)，但沒有發(fā)現(xiàn)C亞型。PERV主要結(jié)構(gòu)蛋白基因gag、pol、env不僅在小型豬基因組中存在，而且都能夠轉(zhuǎn)錄為RNA。廣西巴馬小型香豬PERV-A和B亞型病毒混合存在的現(xiàn)象十分嚴(yán)重，高達(dá)85.1％。

3、 為了解PERV-mRNA在廣西巴馬小型豬各個(gè)組織表達(dá)豐度情況，本實(shí)驗(yàn)對(duì)采自兩頭巴馬小型豬的肝、肺、胰、腎、心、脾、胸腺、卵巢、外周血等，進(jìn)行半定量RT-PCR分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PERV-mRNA在腎臟和外周血的表達(dá)豐度最高，在胰臟的表達(dá)豐度最低，而其它臟器的間沒有顯著的差異。 同時(shí)本研究還對(duì)巴馬小型豬PERV-env基因在不同世系間的變化情況，克隆得到了18株env全長(zhǎng)基因(包括7個(gè)世系和兩組三代親源關(guān)系)，經(jīng)過遺傳進(jìn)化樹