InnVit基因對黑素細胞生物學功能的影響及其分子機制.pdf

1、白癜風是一種色素脫失性皮膚病,以表皮、粘膜和毛發(fā)的黑素細胞脫失形成的白斑、灰白發(fā)為主要癥狀,其發(fā)病機制存在自身免疫學、氧化應激學、神經(jīng)學以及遺傳學等多種假說。近年來,國內外大量研究表明白癜風的發(fā)病與遺傳因素密切相關,可能是一種多基因遺傳病。
　　 據(jù)報道InnVit基因是與白癜風患者的黑素細胞表達下調相關的新基因。通過序列比對發(fā)現(xiàn)InnVit基因為缺少81bp內含子的FBXO11基因。為了探討InnVit基因在黑素細胞中的生物學

2、功能,明確InnVit基因在白癜風中的作用,本論文構建了沉默InnVit基因的siRNA及InnVit基因過表達載體p3XF-P120,研究InnVit基因的抑制和過表達對黑素細胞生物學活性及酪氨酸酶輸出的影響。
　　 論文通過設計構建了人工合成的特異性siRNA,同時構建了該基因的過表達質粒,同時分別轉染黑素細胞,從而研究InnVit基因抑制和過表達對黑素細胞生物學功能及黑素細胞酪氨酸酶表達及內質網(wǎng)輸出的的影響。
　　

3、 首先,檢測了InnVit基因mRNA和蛋白的表達,siRNA的抑制作用顯著降低了InnVit基因mRNA和蛋白的表達量,p3XF-P120質粒的過表達顯著增加了InnVit基因mRNA和蛋白的表達量。
　　 其次,InnVit基因抑制和過表達對黑素細胞增殖、凋亡及遷移相關生物學功能的影響。采用siRNA抑制和質粒載體過表達后,InnVit基因的過表達促進了細胞增殖,抑制細胞凋亡;InnVit基因的抑制使黑素細胞會出現(xiàn)從G0/G

4、1期到S期的細胞周期停滯現(xiàn)象,極大地降低了細胞增殖和存活的能力,同時顯著增加黑素細胞的早期凋亡水平。細胞遷移能力及酶活性檢測表明,siRNA抑制和過表達InnVit基因對細胞遷移力及2金屬蛋白酶MMP9和MMP的表達沒有影響。推測,InnVit基因的抑制主要通過促進細胞凋亡和細胞周期停滯而降低黑素細胞的存活和增殖能力。
　　 最后,研究了InnVit基因對黑素細胞內質網(wǎng)膨脹與酪氨酸酶的相關性。掃描電鏡觀察表明,siRNA抑制的黑

5、素細胞內質網(wǎng)有明顯的膨脹擴大現(xiàn)象,其酪氨酸酶蛋白表達存在極顯著的增加。細胞免疫熒光共定位了酪氨酸酶和內質網(wǎng)標記鈣網(wǎng)蛋白,發(fā)現(xiàn)抑制組細胞的酪氨酸酶大部分停留在內質網(wǎng)中,表明其酪氨酸酶的內質網(wǎng)輸出發(fā)生阻滯,可見抑制InnVit基因表達影響了黑素細胞的酪氨酸酶從內質網(wǎng)輸出,導致了細胞內質網(wǎng)膨脹,從而導致細胞生物學活性異常。
　　 以上研究表明,本研究為InnVit基因影響黑素細胞的增殖和凋亡能力提供了有力的證據(jù),并揭示了白癜風黑素細胞