PRRSV監(jiān)測(cè)技術(shù)平臺(tái)的建立及其在疫情預(yù)警系統(tǒng)中的初步應(yīng)用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬的嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)與繁殖障礙疾病，是目前影響?zhàn)B豬業(yè)健康發(fā)展的最重要疾病之一。當(dāng)前國(guó)內(nèi)外采用的PRRS檢測(cè)方法主要以ELISA及PCR為主。這些方法具有快速、省時(shí)等優(yōu)勢(shì)，但操作復(fù)雜、容易出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性。因此，建立一個(gè)快速、準(zhǔn)確、高通量的檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)用以PRRS流行預(yù)警至關(guān)重要。本論文以出入境生豬為研究對(duì)象，在前人的基礎(chǔ)上建立了兩種實(shí)時(shí)熒光PCR方法，并在國(guó)內(nèi)首次

2、建立、報(bào)道了PCR-DHPLC檢測(cè)方法，將其用于出入境生豬PRRS的監(jiān)控檢測(cè)，對(duì)PRRS預(yù)警體系的建立和應(yīng)用進(jìn)行了探索，并在PRRS的防控中取得良好效果。
　　1.建立PRRSV SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法
　　以PRRSV美洲株的GP5基因?yàn)榘谢?，設(shè)計(jì)引物，調(diào)整PCR體系內(nèi)各組分及循環(huán)參數(shù)，最終建立PRRSV SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法。該方法特異性好，與PCV-2、PRV、CSFV等

3、沒(méi)有交叉反應(yīng)；靈敏度高達(dá)10個(gè)拷貝；重現(xiàn)性良好，各重復(fù)樣品間擴(kuò)增曲線擬合程度高。
　　2.建立PRRSV和HP-PRRSV雙重TaqMan實(shí)時(shí)熒光PCR方法
　　以美洲株P(guān)RRSV的N蛋白基因、HP-PRRSV的Nsp2基因?yàn)榘行蛄校O(shè)計(jì)2對(duì)引物、探針，分別建立美洲株P(guān)RRSV和HP-PRRSV的單一TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究建立了PRRSV和HP-PRRSV的雙重TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光

4、PCR檢測(cè)方法，可以鑒別檢測(cè)缺失株與美洲株，特異性好，與PCV-2、PPV、CSFV、SIV、PRV和JEV等無(wú)交叉反應(yīng)；靈敏度高，PRRSV美洲株靈高達(dá)9.2個(gè)拷貝，HP-PRRSV高達(dá)56個(gè)拷貝；且重復(fù)性較好，批內(nèi)變異系數(shù)小于1％，批間變異系數(shù)小于3%。
　　3.首次建立PRRSV PCR-DHPLC方法
　　以PRRSV標(biāo)準(zhǔn)株的GP5基因?yàn)榘谢?，分別設(shè)計(jì)克隆用引物和PCR-DHPLC檢測(cè)用引物，在國(guó)內(nèi)首次建立了PRR

5、SV PCR-DHPLC檢測(cè)方法，該方法特異性、重現(xiàn)性良好，靈敏度高達(dá)10個(gè)拷貝/單位，將其用于臨床檢測(cè)表明，PCR-DHPLC與Taqman探針Real-time PCR具有同樣的檢測(cè)靈敏度，能檢測(cè)出常規(guī)RT-PCR不能檢出的病料，具有較好的適用性。
　　4.所建立的檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)在 PRRS流行預(yù)警中的應(yīng)用及出入境生豬 PRRS預(yù)警體系框架的建立
　　結(jié)合本研究所建立的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光PCR法、PRRSV和H