產ESBLs枸櫞酸桿菌的多重耐藥性研究.pdf

1、隨著抗菌藥物在臨床上的廣泛應用，在抗菌藥物的選擇壓力下，細菌的耐藥性逐漸增強。多重耐藥菌的出現(xiàn)給臨床治療帶來很大困難，已成為當前研究的熱點。細菌的耐藥機制主要包括以下幾種：①滅活酶的產生；②膜通透性下降；③主動外排功能；④靶位改變。不同的細菌其耐藥機制也不同，尤其是對不同的抗菌藥物。例如腸桿菌科細菌對β-內酰胺類抗菌藥物的耐藥機制主要是β-內酰胺酶的產生。由于不同的細菌對每一類抗菌藥物的耐藥機制不同，這就需要我們對其耐藥機制進行深入研究

2、，以便研制新的抗菌藥物來對抗細菌的多重耐藥性。枸櫞酸桿菌不僅是人類腸道的正常寄居菌，也是重要的條件致病菌，當機體抵抗力下降時，可引起人類腸道、泌尿道、呼吸道、創(chuàng)傷以及嚴重的院內感染等。枸櫞酸桿菌對常用的抗菌藥物（如β-內酰胺類、氨基糖苷類和喹諾酮類等藥物）的耐藥性日益嚴重，出現(xiàn)了多重耐藥菌，針對這一現(xiàn)象，研究產ESBLs枸櫞酸桿菌的多重耐藥性是否與整合子有關，進一步檢測耐藥基因型、確定耐藥傳播方式、尋找治療產ESBLs多重耐藥菌株的藥物

3、，為控制此類細菌的傳播以及臨床治療提供理論依據。
　　 本文采用K-B法（紙片擴散法）對臨床分離的枸櫞酸桿菌進行藥敏試驗，用頭孢硝噻吩紙片法進行β-內酰胺酶的檢測；采用WHONET5.4軟件對懷疑產ESBLs、AmpC酶菌株進行初步篩選，用ESBLs確證試驗檢測菌株是否產生ESBLs用三維試驗確定產ESBLs菌株；用改良AmpC酶紙片法、三維試驗檢測菌株是否產AmpC酶并進行比較。采用TEM、SHV、CTX-M組引物對產ESBL

4、s菌株進行PCR檢測，并對TEM陽性的PCR擴增產物進行DNA測序；采用文獻報道的AmpC酶6對引物進行多重PCR檢測，確定基因型；對菌株進行qnr、I類整合子基因檢測，并對整合子可變區(qū)PCR擴增產物進行DNA測序，確定耐藥基因盒的種類和數量，驗證整合子在耐藥傳播中的作用；應用質粒接合傳遞試驗了解耐藥基因的傳遞方式。研究的68株枸櫞酸桿菌中，弗勞地枸櫞酸桿菌占86.8％（59/68）、異型枸櫞酸桿菌占5.9％（4/68）、丙二酸鹽枸櫞酸

5、桿菌占5.9％（4/68），布氏枸櫞酸桿菌占1.4％（1/68）；β-內酰胺酶陽性60株，陽性率88.2％；三維試驗檢測產ESBLs菌株17株（占25％），高產AmpC酶菌株3株（占4.4％）。68株枸櫞酸桿菌中，通過改良AmpC紙片表型法、三維試驗以及多重PCR檢測，有17株產AmpC酶基因，其中3株高產AmpC菌株為CIT型、14株誘導型AmpC基因為DHA型；而三維試驗僅檢測到3株高產AmpC菌株，未檢測到誘導型AmpC酶。在17

6、株產ESBLs菌株中，通過采用TEM、SHV、OXA、CTX-M引物進行PCR檢測，13株產生TEM，通過DNA測序為TEM-1型；17株ESBLs的基因型均為CTX-M型。對產ESBLs菌株進行qnr基因檢測，9株qnrA型基因陽性，陽性率為52.9％。I類整合子及其可變區(qū)進行檢測，發(fā)現(xiàn)有11株攜有I類整合子，對其中的兩株可變區(qū)擴增產物進行DNA測序發(fā)現(xiàn)攜帶aadA2和dfrl7兩種基因盒，分別編碼氨基糖苷類和磺胺類抗菌藥物的耐藥性。

7、質粒接合傳遞試驗，17株ESBLs菌株傳遞成功，PCR檢測，12株接合子攜有CTX-M基因，5株接合子同時攜有CTX-M和qnrA基因。用WHONET5.4軟件對產ESBLs菌株進行藥敏分析，臨床分離的產酶枸櫞酸桿菌對亞胺培南100％敏感，對其他抗菌藥物耐藥嚴重。
　　 本研究得出以下結論：⑴臨床分離的產ESBLs枸櫞酸桿菌呈現(xiàn)多重耐藥性，檢出率達25％，其耐藥菌株往往攜有多種耐藥基因。⑵我院臨床分離的產ESBLs枸櫞酸桿菌中檢