P13Kp85、p-Akt在人血管瘤裸鼠移植模型中的表達(dá)及調(diào)控.pdf

1、目的:觀察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)在人血管瘤裸鼠移植模型中的表達(dá)，并對(duì)其進(jìn)行藥物干預(yù)，探討PI3K/Akt信號(hào)通路在小兒血管瘤的發(fā)生、發(fā)展及消退過(guò)程中的作用。
　　 方法:選用3-4周大小的裸小鼠18只，雌雄不掏，體重17.0-22.0g，將手術(shù)切除的1例1歲3月齡女?huà)胱笮夭吭錾诿?xì)血管瘤制成組織塊，轉(zhuǎn)種于裸小鼠雙側(cè)腋下、頸部、腰背部、腹股溝處，每只6處，共108處。生長(zhǎng)45天后，將移植成功標(biāo)本隨機(jī)分

2、成:①對(duì)照組:每個(gè)瘤體內(nèi)注射生理鹽水0.05ml。②干預(yù)組分四組:a組:每個(gè)瘤體內(nèi)注射0.5umol/L的胰島素樣生長(zhǎng)因子0.05ml;b組:每個(gè)瘤體內(nèi)注25μmol/L的LY2940020.05ml;c組:每個(gè)瘤體內(nèi)注射10nmol/L的雷帕霉素0.05ml;d組:每個(gè)瘤體內(nèi)注射糖皮質(zhì)激素(1g/L的曲安縮松)0.05ml。于藥物注射當(dāng)日（用藥前）、注射后3日、1周、2周肉眼大體觀察移植瘤形態(tài)變化，光鏡觀察移植瘤組織結(jié)構(gòu)變化，免疫組化

3、檢測(cè)PI3Kp85、p-Akt蛋白的分布及表達(dá)情況，RT-PCR檢測(cè)PI3K p85 mRNA、p-Akt mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.裸鼠及移植瘤存活情況:飼養(yǎng)60天，所有裸鼠均存活。成瘤率為76.77％(83/108)，移植瘤在移植前30天內(nèi)均不同程度的縮小，30天后開(kāi)始緩慢生長(zhǎng)，45天到59天之間生長(zhǎng)迅速。
　　 2.大體形態(tài)學(xué)觀察:用藥前到用藥后兩周內(nèi)，對(duì)照組移植瘤體積稍增大，質(zhì)軟，顏色

4、逐漸變紅;胰島素生長(zhǎng)因子組移植瘤生長(zhǎng)較快，體積增大明顯，質(zhì)軟，于皮外觀察呈紫藍(lán)色;LY294002、雷帕霉素、曲安奈德組移植瘤停止生長(zhǎng)，體積逐漸變小，質(zhì)軟，顏色逐漸發(fā)白。
　　 3.組織病理學(xué)表現(xiàn):對(duì)照組及胰島素樣生長(zhǎng)因子組較用藥前血管瘤細(xì)胞團(tuán)界限清楚，細(xì)胞核大、染色深，細(xì)胞間質(zhì)和血管內(nèi)皮細(xì)胞都增多，并可見(jiàn)微血管。其中胰島素生長(zhǎng)因子組毛細(xì)血管管腔密集，有血竇生成，內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞。LY294002、雷帕霉素、曲安奈德組血管瘤細(xì)胞核較

5、小呈固縮狀，染色淺間隔組織多，并呈現(xiàn)空泡狀，無(wú)明顯的血管腔樣結(jié)構(gòu)，多被纖維結(jié)締組織和脂肪組織替代。
　　 4.免疫組化結(jié)果:LY294002、雷帕霉素、曲安奈德組PI3K p85陽(yáng)性表達(dá)率分別為80％，80％及86.67％，p-Akt陽(yáng)性表達(dá)率分別為86.67％，73.33％及80％。對(duì)照組及胰島素生長(zhǎng)因子組PI3Kp85及p-Akt陽(yáng)性表達(dá)率均為100％。用藥3天后，雷帕霉素組p85及p-Akt蛋白的IOD值分別為p85(83

6、.172±10.76)/p-Akt(79.578±11.745)，較對(duì)照組p85(143.584±26.954)/p-Akt(111.776±10.916)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。用藥一周后LY294002、雷帕霉素、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分別為p85(81.042±11.451)/p-Akt(65.99±6.313)、p85(93.784±17.345)/p-Akt(72.096±18.01)、(89

7、.6±19.719)/p-Akt(82.566±15.268)，較對(duì)照組p85(135.396±31.714)/p-Akt(115.096±19.595)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，用藥一周后，胰島素樣生長(zhǎng)因子組p85及p-Akt蛋白的IOD值為p85(169.178±7.765)/p-Akt(145.054±12.631)，較對(duì)照組p85(135.396±31.714)/p-Akt(115.096±19.595)升高，差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。用藥兩周后，雷帕霉素、LY294002、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分別為p85(58.684±20.057)/p-Akt(49.596±14.186)、p85(58.788±20.314)/p-Akt(55.698±12.744)、p85(64.594±25.911)/p-Akt(64.078±20.922)，表達(dá)較對(duì)照組p85(145.374±26.125)/p-Akt(115.498±19

9、.381)下降，差異具有顯著性(P＜0.01)用藥兩周后，胰島素樣生長(zhǎng)因子p85及p-Akt蛋白的IOD值為p85(179.322±20.893)/p-Akt(162.43±13.409)，表達(dá)較對(duì)照組p85(145.374±26.125)/p-Akt(115.498±19.381)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.Rt-PCR結(jié)果:用藥3天后，LY294002、雷帕霉素、曲安奈德組p85及p-Akt蛋白的mR

10、NA表達(dá)值分別為p85(0.04±0.014)/p-Akt(0.058±0.017)、p85(0.039±0.01)/p-Akt(0.059±0.011)、p85(0.042±0.012)/p-Akt(0.053±0.021)，較對(duì)照組p85(0.077±0.011)/p-Akt(0.121±0.031)下降，差異具有顯著性(P＜0.01）。用藥一周后，雷帕霉素、LY294002、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分別為p85(0

11、.034±0.012)/p-Akt(0.028±0.011)、p85(0.029±0.012)/p-Akt(0.043±0.018)、p85(0.027±0.007)/p-Akt(0.046±0.016)，較對(duì)照組p85(0.085±0.025)/p-Akt(0.12±0.03)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，用藥一周后，胰島素樣生長(zhǎng)因子組p85及p-Akt蛋白的IOD值為p85(0.131±0.042)/p-Akt(0.238

12、±0.082)，較對(duì)照組p85(0.085±0.025)/p-Akt(0.12±0.03)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。用藥兩周后，雷帕霉素、LY294002、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分別為p85(0.026±0.008)/p-Akt(0.028±0.009)、p85(0.025±0.009)/p-Akt(0.027±0.009)、p85(0.022±0.009)/p-Akt(0.027±0.01)，表達(dá)較對(duì)照

13、組p85(0.096±0.014)/p-Akt(0.134±0.039)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;用藥兩周后，胰島素樣生長(zhǎng)因子p85及p-Akt蛋白的IOD值為p85(0.188±0.066)/p-Akt(0.309±0.105)，表達(dá)較對(duì)照組p85(0.096±0.014)/p-Akt(0.134±0.039)增高，差異具有顯著性（P＜0.01）。
　　 結(jié)論:
　　 1.血管瘤裸鼠移植模型中血管瘤內(nèi)皮細(xì)