家蠶微衛(wèi)星序列（SSR）在染色體上的定位分析.pdf

1、染色體是細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，是遺傳物質(zhì)的載體。染色體的結(jié)構(gòu)、形態(tài)、功能是細(xì)胞遺傳學(xué)中的核心內(nèi)容。染色體核型分析，是認(rèn)識(shí)生物遺傳、變異和進(jìn)化的重要方法，已成為研究生物遺傳多態(tài)性的重要工具之一。這種方法通過(guò)比較細(xì)胞染色體的形態(tài)參數(shù)，如相對(duì)長(zhǎng)度、著絲粒指數(shù)、長(zhǎng)短臂之比等將每條染色體按各自的特征區(qū)分開(kāi)，得到一定的染色體組型。家蠶染色體存在一定的特殊性；數(shù)目多、中期形態(tài)差異甚微、無(wú)長(zhǎng)短臂之比等可辨特征。早期，家蠶染色體識(shí)別和基岡定位研究主要利用

2、性腺減數(shù)分裂粗線(xiàn)期的染色體、早期胚胎和滯育卵有絲分裂早中期的染色體作為材料，按照相對(duì)長(zhǎng)度和部分限性易位系統(tǒng)或缺失等來(lái)進(jìn)行核型分析?，F(xiàn)代科技的發(fā)展與完善，使分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)日益滲透到染色體研究中。熒光原位雜交技術(shù)(FISH)已成為連接細(xì)胞遺傳學(xué)與分子遺傳學(xué)的橋梁，使得我們可以在分子水平更加詳細(xì)地研究染色體。 本研究在前人的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)家蠶染色體核型模式的分析，近而利剛FISH技術(shù)，對(duì)家蠶微衛(wèi)星序列SSR在家蠶染色體進(jìn)行了定位

3、?，F(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下： 1.家蠶染色體的核型模式 選取家蠶品種人造卵母細(xì)胞粗線(xiàn)期染色體，篩選了10個(gè)形態(tài)清晰、分散良好、背景干凈、染色體數(shù)目完整的細(xì)胞。用Image J對(duì)其絕對(duì)長(zhǎng)度和相對(duì)長(zhǎng)度進(jìn)行了測(cè)算。并對(duì)最好的一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行了核型排列。結(jié)果表明：不同細(xì)胞的染色體總長(zhǎng)度差異較大，10個(gè)細(xì)胞染色體平均總長(zhǎng)為311.903μm，最長(zhǎng)為388.869μm，最短為267.884μm,兩者相差120.985μm；其次，同一細(xì)胞內(nèi)各

4、染色體絕對(duì)長(zhǎng)度也互不相同，最長(zhǎng)染色體的長(zhǎng)度與最短染色體的比值最大為3.881，平均為3.007，而且不同細(xì)胞相同序號(hào)染色體之間的長(zhǎng)度差異也很大。如2號(hào)染色體最短的為12.924μm，最長(zhǎng)的為19.928μm，相差達(dá)7.004μm。因此，絕對(duì)長(zhǎng)度作為家蠶染色體核型分析的依據(jù)較小。但10個(gè)細(xì)胞相同序號(hào)染色體的相對(duì)長(zhǎng)度比較接近，最高標(biāo)準(zhǔn)差為0.889，最低僅為0.095，相對(duì)絕對(duì)長(zhǎng)度而言，差異更小。 另外，本文就染色體的絕對(duì)長(zhǎng)度與相對(duì)

5、長(zhǎng)度與前人所分析的數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較，28條染色體中絕對(duì)長(zhǎng)度平均值相差最大為2.163um，最小為0.957um；而相對(duì)長(zhǎng)度的差異就更小，最大為0.494％，最小僅有0.003％。并對(duì)28條染色體的相對(duì)長(zhǎng)度的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與前人數(shù)據(jù)進(jìn)行了方差分析，結(jié)果顯示：同一序號(hào)染色體測(cè)量值沒(méi)有顯著差異，這表明相對(duì)長(zhǎng)度是一個(gè)比較穩(wěn)定的參數(shù)，它代表了某一條染色體在整個(gè)染色體群中所占的比例。能相對(duì)避免因不同時(shí)期染色體收縮程度不同而造成絕對(duì)長(zhǎng)度的差異。由此說(shuō)明在材料

6、相同的情況下，減數(shù)分裂粗線(xiàn)期染色體長(zhǎng)度變化并無(wú)明顯差異，可以用作核型分析，粗線(xiàn)劃染色體的相對(duì)長(zhǎng)度是一個(gè)比較穩(wěn)定的數(shù)據(jù)，適合作為建立模式的參數(shù)。最后，綜合以上的各種參數(shù)，建立了一個(gè)家蠶減數(shù)分裂染色體的核型模式圖，初步反映每條染色體各自的特征。用Image J染色體分析軟件來(lái)測(cè)量家蠶粗線(xiàn)期染色體相對(duì)長(zhǎng)度和絕對(duì)長(zhǎng)度與傳統(tǒng)的細(xì)銅絲測(cè)量相比，減少了步驟，降低了主觀誤差，大大提高了準(zhǔn)確性和工作效率。 2.SSR的FISH研究 以D

7、IG標(biāo)記SSR作為探針，對(duì)家蠶不同時(shí)期染色體細(xì)胞進(jìn)行原位雜交，染色體用DAPI復(fù)染。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在雄蠶、雌蠶減數(shù)分裂間期、粗線(xiàn)期和中期，SSR(2301)和SSR(2310)都發(fā)現(xiàn)有雜交信號(hào)。但是相對(duì)于哺乳動(dòng)物而言，信號(hào)檢出率偏低。其中，間期雜交率最高(平均為20.85％和18.84％)；粗線(xiàn)期次之，為10.26％和11.36％；中期最低，為5.66％和2.13％。另外將兩探針混合后雜交，僅在間期和粗線(xiàn)期發(fā)現(xiàn)信號(hào)，而且檢出率非常低，為5.

8、10％和3.17％。每個(gè)探針?lè)謩e挑選10個(gè)信號(hào)位置相對(duì)一致的染色體群進(jìn)行核型分析。發(fā)現(xiàn)SSR(2301)和SSR(2310)以及混合探針雜交信號(hào)均位于染色體核型模式圖中的第16號(hào)染色體。其中含有SSR(2301)探針信號(hào)的染色體相對(duì)長(zhǎng)度是3.475％，含有SSR(2310)探針信號(hào)的染色體相對(duì)長(zhǎng)度是3.350％，含有兩探針混合后的雜交信號(hào)的染色體相對(duì)長(zhǎng)度是3.465％。這一結(jié)果與前面建立的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂粗線(xiàn)期染色體核型模式圖的第16號(hào)