ADAMTS9基因甲基化檢測(cè)對(duì)預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌發(fā)生及判斷預(yù)后的價(jià)值.pdf

1、；g ；l l ；醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師( 或指導(dǎo)小組) 的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專(zhuān)利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。人 白研究生簽名：彳函、 導(dǎo)師簽莎吁二級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽章： _

2、 _ 、．二V 紗年歹 月多／日| ．、；’河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：i 厶 導(dǎo)師簽章二一、I ’Ⅺ| 3 年) 瑪3 7 B中文摘要A D A M T S 9 基因甲基化檢測(cè)對(duì)預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌發(fā)生及判斷預(yù)后的價(jià)值摘 要目的：肝細(xì)胞癌是

3、較為常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率近年來(lái)有上升的趨勢(shì)，但是肝細(xì)胞癌發(fā)病的分子機(jī)制尚未完全明確。隨著表觀遺傳學(xué)研究的深入，抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)域的異常甲基化在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中的作用越來(lái)越受到人們的重視。A D A M T S ( a d i s i n t e g r i n a n d m e t a l l o - p r o t e i n a s ew i t ht h r o m b o s p o n d i nm o t i f

4、 s ) 稱(chēng)為帶有血小板凝血酶敏感蛋白樣模體的解聯(lián)蛋白金屬蛋白酶家族，其基因家族的功能包括細(xì)胞外基質(zhì)的溶解、止血過(guò)程，以及對(duì)血管生成的調(diào)節(jié)等。A D A M T S 9 是其家族成員之一，定位于染色體3 p 1 4 ．3 - p 2 1 ．1 ，是新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)抑癌基因，既往研究表明在食管癌、鼻咽癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌中均發(fā)現(xiàn)A D A M T S 9 高甲基化。但是，A D A M T S 9 與肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本

5、研究以肝癌細(xì)胞、新鮮肝組織及石蠟包埋組織為標(biāo)本，檢測(cè)A D A M T S 9 基因甲基化水平及基因蛋白表達(dá)，結(jié)合患者臨床資料、病理學(xué)特征及生存期資料分析該基因在肝細(xì)胞癌發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后評(píng)價(jià)中的意義。為抑癌基因A D A M T S 9 啟動(dòng)子區(qū)域甲基化檢測(cè)在臨床中的應(yīng)用提供理論支持。方法：1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理：肝癌細(xì)胞株H e p ．G 2 按常規(guī)培養(yǎng)于R P M I ．1 6 4 0培養(yǎng)液中，肝癌細(xì)胞株S M M C ．7 7 2 1

6、 按常規(guī)培養(yǎng)于D M E M 培養(yǎng)液中。兩種細(xì)胞用含5 ．氮雜．2 ’脫氧胞苷( 5 ．A z a - C d R ) 終濃度為1 0u m o I ／L 培養(yǎng)液培養(yǎng)2 4 h ，之后更換不含5 - A z a - C d R 的培養(yǎng)液，繼續(xù)孵育7 2 h 。提取加藥前后細(xì)胞株的D N A ，進(jìn)行甲基化特異性P C R ( M e t h y l a t i o nS p e c i f i cP C R , M S P ) 檢測(cè)。2

7、研究對(duì)象及標(biāo)本： 2 0 0 9 年4 月~ 2 0 1 1 年1 月于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院肝膽外科行手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌患者1 3 2 例，其中男性1 1 3 例，女性1 9 例，年齡2 3 “ 一7 8 歲，平均年齡5 4 ．2 9 - 士9 ．7 8 歲。腫瘤直徑0 ．5 - 2 5 c m 。肝功能C h i l dA 級(jí)1 2 3 例，B + C 級(jí)9 例。1 3 2 例患者中I 期4 0 例，I I 期7 6例，ⅡI 期1 5