華貴櫛孔扇貝視黃醇代謝基因克隆及其表達的初步研究.pdf

1、視黃醇代謝系統(tǒng)對維持動物體內視黃醇的平衡以及其它相關生理功能有重要作用，其以?胡蘿卜素為主要底物，經(jīng)過一系列的酶反應，生成了視黃醇、視黃酯等諸多相關代謝產(chǎn)物。該體系在脊椎動物中有較深入的研究，但在無脊椎動物如軟體動物中，相關的研究還很匱乏，并且不系統(tǒng)。本研究以類胡蘿卜素含量差異明顯的華貴櫛孔扇貝的兩個品系，橙色品系，亦”南澳金貝”和褐色品系為對象，克隆了視黃醇代謝系統(tǒng)的關鍵基因乙醇脫氫酶(ADH)和二酰甘油酰基轉移酶(DGAT)，并對兩

2、個基因序列進行了生物信息學分析;同時研究了ADH，DGAT，以及本實驗室已獲得的視黃醇代謝系統(tǒng)的關鍵基因β胡蘿卜素加氧酶1(BCMO1)，β胡蘿卜素加氧酶2(BCMO2)，這四條基因在兩品系各組織中的表達情況，探究了其與扇貝類胡蘿卜素含量的關系。
　　(1)克隆獲得華貴櫛孔扇貝ADH基因，命名為cnADH，其中cnADH全長1365 bp，5’非翻譯區(qū)長度為70 bp，3’非翻譯區(qū)為83 bp。cnADH包含一個1212 bp的開

3、放閱讀框(ORF)，編碼一個含有404個氨基酸殘基的蛋白質多肽。經(jīng)過多序列BLAST對比鑒定，該基因屬于ADH3類型，亦無脊椎動物中最常見的類型。
　　(2)克隆獲得華貴櫛孔扇貝 DGAT基因，命名為cnDGAT，其中cnDGAT全長1611 bp，5’非翻譯區(qū)長度為61 bp，3’非翻譯區(qū)為161 bp。cnDGAT包含一個1389 bp的開放閱讀框(ORF)，編碼一個含有463個氨基酸殘基的蛋白質多肽。經(jīng)過多序列BLAST對比

4、鑒定，該基因屬于DGAT1類型。
　　(3) ADH，DGAT，BCMO1,BCMO2在兩品系各組織中都有著普遍的表達,在外套膜中的表達量顯著高于其它組織,而且 ADH,DGAT在褐色品系中的表達量稍高于橙色品系,特別是在閉殼肌中。BCMO2在褐色品系血液中的表達量高于 BCMO1,其它組織中兩基因無明顯差異。
　　本研究首次在扇貝中克隆獲得了ADH和DGAT基因的全長，并研究了視黃醇代謝系統(tǒng)中關鍵的ADH，DGAT，BCM