細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Eg95重組非分泌型和分泌型分枝桿菌疫苗的構(gòu)建及免疫學(xué)研究.pdf

1、目的：分別構(gòu)建細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Eg95重組非分泌型和分泌型卡介苗及恥垢分枝桿菌疫苗及免疫學(xué)研究。 方法：分別以卡介苗(BCG)基因組DNA和PGEX-4T-Eg95為模板，PCR擴(kuò)增獲120bp的BCG抗原85B信號(hào)肽序列和423bp的Eg95基因序列。先將Eg95基因序列定向克隆至大腸埃希菌-分枝桿菌穿梭質(zhì)粒pMV261，構(gòu)建非分泌型重組質(zhì)粒pMEg95。再將BCG-Ag85B信號(hào)肽序列定向克隆至pMEg95，構(gòu)建分泌型重組質(zhì)粒p

2、SMEg95。電穿孔法將兩型重組質(zhì)粒分別導(dǎo)入BCG菌及恥垢分枝桿菌。分別用兩型重組疫苗免疫小鼠，于第五周和第八周用ELISA法檢測(cè)體液免疫指標(biāo)。 結(jié)果：雙酶切、PCR擴(kuò)增及測(cè)序鑒定證實(shí)，克隆基因Eg95序列和Ag85B信號(hào)肽序列正確插入載體pMV261，細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Eg95重組非分泌型和分泌型BCG-Eg95和M.s-Eg95疫苗構(gòu)建成功。SM型酶免分析儀檢測(cè)第五周和第八周的IgG1和IgG2a顯示，分泌型重組疫苗較非分泌型重組

3、疫苗抗體效價(jià)高；重組BCG較重組M.S的抗體效價(jià)高。 結(jié)論：構(gòu)建了含有Eg95基因序列和BCG-Ag85B信號(hào)肽序列的細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Eg95重組非分泌型和分泌型BCG-Eg95和M.s-Eg95分枝桿菌疫苗。比較兩型重組疫苗免疫小鼠后體液免疫水平，重組BCG-Eg95和M.s-Eg95疫苗可在BCG和M.s中表達(dá)Eg95抗原蛋白；分泌型重組疫苗較非分泌型重組疫苗免疫效果強(qiáng)；作為疫苗載體，BCG較M.s具有更好的免疫效果。