植入前胚胎HLA多位點(diǎn)測定的研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文植入前胚胎HLA多位點(diǎn)測定的研究姓名：韓秀君申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)（生殖內(nèi)分泌）指導(dǎo)教師：金帆;黃荷鳳2003.5.1浙江太學(xué)碩士學(xué)位論文與需要移植造血干細(xì)胞的患者同胞H L A 匹配的胚胎行移植術(shù)。然而，P G D 時診斷材料極為有限，只有1 - 2 個胚胎卵裂細(xì)胞，約1 5 ～3 0 p g的基因組D N A ，而且常規(guī)的P C R 技術(shù)易受實驗條件的影響，故從9 0 年代后期開始，熒光原位雜交( F

2、l u o r e s c e n ti ns i t uh y b r i d i z a t i o n ，F(xiàn) I S H ) 技術(shù)、多重聚合酶鏈反應(yīng)( M u l t i p l e x p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n ) 、巢式( N e s t e d ) F C R 以及全基因組擴(kuò)增( W h o l eg e n o m ea m p l if i c a t i

3、 o n ，W G A ) 等技術(shù)應(yīng)用于P G D 診斷的報道逐漸增加，有效地提高了診斷率。本文應(yīng)用多重巢式P C R ( M u l 卸l e xn e s t e dP C R ,M N ．P C R ) 和擴(kuò)增前引物延伸( P r i m e r e x t e n s i o n p r e a m p l i f i c a t i o n ，P E P ) 技術(shù)可增加D N A 的遺傳信息量及目的片段擴(kuò)增成功率。多重P C

4、R 是在同一P C R 系統(tǒng)內(nèi)引入多對引物，可同時擴(kuò)增同一模板的多個位點(diǎn)或不同染色體的幾個基因位點(diǎn)，實現(xiàn)多位點(diǎn)分析。巢式P C R 是擴(kuò)增一個基因的不同區(qū)段，在外長片段內(nèi)再擴(kuò)增所需要的內(nèi)短區(qū)段，減少非特異性片段的產(chǎn)生。多重P C R 和巢式P C R 相結(jié)合，提高了P C R 反應(yīng)的特異性和敏感性，減少了引物二聚體的形成。多重巢式P C R 是目前P G D 應(yīng)用最多的方法之一。擴(kuò)增前引物延伸法是W G A 的方法之一，可擴(kuò)增微量D N

5、 A 模板甚至單個細(xì)胞的整個基因組，后續(xù)M N ．P C R ，進(jìn)一步增加D N A 遺傳信息量，應(yīng)用于P G D ，可滿足同時分析H L A 的多個位點(diǎn)以及多種不同基因病或多次重復(fù)檢測同種基因病。P E P 以隨機(jī)組成的1 5 個堿基寡核苷酸作為引物，在低溫下連接、延伸，隨機(jī)擴(kuò)增整個基因組D N A 。國外已有利用P E P 進(jìn)行單細(xì)胞神經(jīng)節(jié)苷脂病G M 2 I 型、d 地中海貧血、R h D 血型、高度多態(tài)短串聯(lián)重復(fù)序列( S h

6、o a t a n d e m r e p e a t , S T R )等基因位點(diǎn)的研究。國內(nèi)有徐晨明和王敏進(jìn)行杜氏肌營養(yǎng)不良癥( D u c e n n e sm u s c u l a r d y s t r o p h y ，D M D ) 基因檢測，袁淑慧等進(jìn)行1 3 地中海貧血C D l 7 和n t 一2 8突變基因及連鎖基因( A T T T T ) 、1 8 和2 1 號染色體特異短串聯(lián)重復(fù)序列D 1 8 S 5 1