糖蛋白質(zhì)組學(xué)分析肝癌相關(guān)血清糖蛋白巖藻糖基化異常.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文糖蛋白質(zhì)組學(xué)分析肝癌相關(guān)血清糖蛋白巖藻糖基化異常姓名：廖劍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：殷正豐20100501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文和健康人組血清標(biāo)本中巖藻糖基化蛋白，通過(guò)飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)富集的蛋白，建立各組巖藻糖基化蛋白質(zhì)指紋圖譜模型，軟件分析后建立診斷模型，并進(jìn)行盲法驗(yàn)證。3應(yīng)用基于小扁豆凝集素親和的CLINPROT系統(tǒng)建立肝癌相關(guān)血清巖藻糖基化肽指紋圖譜模型：應(yīng)用小扁豆凝集素磁珠富集肝癌組、

2、肝硬化組、慢性肝炎組和健康人組血清標(biāo)本中巖藻糖基化蛋白，取部分富集的蛋白進(jìn)行胰酶酶解，然后將酶解后的多肽通過(guò)飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，建立各組巖藻糖基化肽指紋圖譜模型，軟件分析后建立診斷模型，并進(jìn)行盲法驗(yàn)證?！窘Y(jié)果】1差異蛋白鑒定和分析：通過(guò)雙向電泳分離鑒定出22種血清蛋白質(zhì)，其巖藻糖基化程度在肝癌組、慢性肝病組和健康人組中有明顯差異。其中a1B糖蛋白、激肽原1、血液結(jié)合素等巖藻糖基化程度在肝癌組、慢性肝病組和健康人組中依次降低；相反，

3、載脂蛋白H、補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白1等巖藻糖基化程度則在肝癌組、慢性肝病組和健康人組中依次升高。另外，肝癌組中角蛋白9、角蛋白10等巖藻糖基化程度高于慢性肝病組和健康人組；而健康人組中抗凝血酶III、富含組氨酸糖蛋白、Gt1微球蛋白前體等巖藻糖基化程度高于肝癌組和慢性肝病組；補(bǔ)體C7和ATP依賴的RNA解旋酶DDX41巖藻糖基化程度則是肝癌組和慢性肝病組高于健康人組；RNA結(jié)合蛋白12巖藻糖基化程度則是慢性肝病組和健康人組高于肝癌組；a2巨

4、球蛋白和細(xì)小白蛋白a巖藻糖基化程度則是肝癌組和健康人組高于慢性肝病組。通過(guò)Westernblot驗(yàn)證，q1B糖蛋白和巖藻糖基化a1B糖蛋白表達(dá)在肝癌組、慢性肝病組和健康人組之間沒(méi)有顯著差異(尸005)。而載脂蛋白H和巖藻糖基化載脂蛋白H表達(dá)在肝癌組、慢性肝病組和健康人組之間有顯著差異(尸005)，巖藻糖基化載脂蛋白H表達(dá)在三組之間差異更為明顯(1：156：383)。2肝癌相關(guān)血清巖藻糖基化糖蛋白質(zhì)指紋圖譜模型建立和應(yīng)用：將4組血清蛋白質(zhì)

5、指紋圖譜模型進(jìn)行各種配對(duì)的比較，建立一系列分類模型。分析模型后發(fā)現(xiàn)血清糖蛋白巖藻糖基化異常與肝癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。經(jīng)過(guò)盲法檢測(cè)，從所有血清標(biāo)本、慢性肝病和肝硬化中分別檢出肝癌的靈敏度依次為7407％、8148％冪18889％，特異性依次為7681％、8372％和8636％。將該系列診斷模型與AFP檢測(cè)聯(lián)用，肝癌診斷的靈敏度和特異性都得到顯著提高，檢測(cè)靈敏度依次為8148％、8889％和9259％，特異性依次為8841％、9070％和954