豬抑肌素基因剔除成纖維細(xì)胞系的建立及體外發(fā)育.pdf

1、豬抑肌素基因myòstatin又稱GDF-8，屬于TGF-β超家族，是具有調(diào)控肌肉重量的一種分泌型糖蛋白因子。該基因與骨骼肌總量的調(diào)節(jié)有關(guān)，其基因編碼區(qū)保守部分的突變將使得肌肉的發(fā)育失去負(fù)調(diào)控作用而導(dǎo)致肌肉肥大。在自然界中存在Myostatin基因突變導(dǎo)致的比利時藍(lán)牛和皮特蒙特牛的雙肌表型，該基因的發(fā)現(xiàn)，為育種工作者提供了新的科研思路，為進(jìn)一步提高動物產(chǎn)肉性能提供了有力的事實依據(jù)，為分子水平定向育種奠定了堅實的理論基礎(chǔ)。因此育種工作者除

2、了可以利用現(xiàn)有的雙肌動物進(jìn)行繁育外，還可以采用基因打靶技術(shù)來剔除Myostatin基因，獲得轉(zhuǎn)基因克隆動物，以達(dá)到改進(jìn)肌肉質(zhì)量和重量的目的，為家畜的高質(zhì)高效生產(chǎn)提供新技術(shù)。目前，基因打靶技術(shù)已經(jīng)成為研究基因功能的重要技術(shù)之一。它是80年代后半期基于DNA同源重組原理發(fā)展起來的一門新技術(shù)，是一種定向改變細(xì)胞或生物個體遺傳信息的實驗手段。通過對生物體遺傳信息的定向修飾，并使修飾后的遺傳信息在生物體內(nèi)遺傳，表達(dá)突變性狀，從而達(dá)到對其基因功能的

3、研究。 本實驗采用胰酶消化法和組織塊法，建立大白豬的胎兒成纖維細(xì)胞系；采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建好的打靶載體導(dǎo)入大白豬胎兒成纖維細(xì)胞中，并對轉(zhuǎn)染條件：脂質(zhì)體濃度、質(zhì)粒微克數(shù)、轉(zhuǎn)染時間、G418篩選濃度和維持濃度等條件進(jìn)行了優(yōu)化；轉(zhuǎn)染后的大白豬胎兒成纖維細(xì)胞采用G418篩選，然后繼續(xù)用含G418和GANC的培養(yǎng)液維持篩選；最后采用PCR法鑒定所得細(xì)胞株；將所獲得的陽性細(xì)胞移入去核的豬卵母細(xì)胞內(nèi)，構(gòu)建克隆胚，進(jìn)行體外發(fā)育。研究認(rèn)為，采用