新化合物A1998的藥學研究.pdf

1、丁二酸-(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)-二酯(A1998)是我們通過結構衍生合成得到的一個新甾體化合物，該化合物在抗氧化和抗炎方面表現(xiàn)出很好的活性。運用藥劑學、藥理學方法對其進行了系統(tǒng)的藥學研究，旨在將其開發(fā)為治療肝病新藥。論文主要包括以下一些內容：A1998固體分散體(Solid Dispersion，SD)的制備及增溶機制分析；A1998抗自由基和氧化性肝損傷藥理作用的研究；柱前衍生高效液相(High Performance

2、Liquid Chromatography，HPLC)激光誘導熒光檢測對生物樣品中A1998的定量分析。結果概述如下： (1)運用溶劑法制備了A1998∶PVP(Polyvinylpolypyrrolidone，PVP)比例1∶2-1∶10的SD，以機械混合法制備了同比例的物理混合物(Physical Mixture，PM)。平衡溶解度和體外溶出度的比較，A1998∶PVP比例為1∶6-1∶10的SD在水中溶解度可以達到0.8

3、mg/ml以上，體外溶出度可以到達80﹪以上；而A1998原藥、各比例PM在水中溶解度和體外溶出度均為0，A1998∶PVP比例為1∶2和1∶4的SD也幾乎不溶于水，體外溶出度也非常低。這說明高PVP比例的SD，可大大提高A1998的溶解度和體外溶出度，從而有利于提高A1998的生物利用度。進一步以X-Ray粉末衍射、熱重分析、差示掃描量熱法、電子顯微鏡掃描和紅外光譜方法比較了A1998∶PVP各比例SD和PM的理化性質，推測A1998

4、的SD增溶機制為：SD體系中A1998粒徑的減少；A1998從結晶轉變成無定形態(tài)或者微晶態(tài)；形成A1998/PVP固態(tài)溶液；PVP阻止了A1998的再聚集和結塊；增加了A1998的潤濕性；增加藥物在載體擴散層中的溶解度等。 (2)通過體外抗自由基和抗氧化實驗模型，CCl<,4>和H<,2>O<,2>致人肝細胞(LO2)自由基和氧化性損傷實驗；A1998對人肝星狀細胞(Hepatic Stellate Cells，HSC)增殖的抑

5、制作用實驗證明：A1998H能夠從兩方面抵抗CCl<,4>和H<,2>O<,2>對肝細胞的氧化性損傷作用，一是提高超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)等抗氧化酶的活性，二是直接清除自由基，減少脂質過氧化產(chǎn)物丙二醛(Malondialdehyde，MDA)的產(chǎn)生，保護肝細胞免受自由基損傷。同時，A1998能夠明顯抑制活化的HSC

6、的增殖，促進其凋亡，證明還對肝細胞氧化性損傷后進一步至肝纖維化有一定的抑制作用。 (3) 抗肝損傷整體實驗動物模型： CCl<,4>致小鼠急性肝損傷模型的實驗結果表明，A1998能夠降低CCl<,4>急性肝損傷小鼠血清中谷草轉氨酶(Alanine Transaminase， ALT)、谷丙轉氨酶 (Aspartate aminofransferase，AST)的含量，降低肝勻漿中脂質過氧化物MDA含量，提高肝勻漿中SOD

7、和GSH-Px酶活性。進一步證實A1998抗氧化、保護肝臟機理與其直接清除自由基，提高體內抗氧化酶活性有關。 A1998預防慢性酒精性肝損傷實驗結果表明，A1998能夠明顯降低慢性酒精性肝損傷大鼠的血清ALT、AST、羥脯氨酸(Hydroxyproline，Hyp)、總膽紅素(Total Bilirubin，TB)；提高總蛋白(Total Protein，TP)、白蛋白(Albumin，ALB)含量以及白蛋白/球蛋白(Album

8、in/Globulin，A/G)比例；提高肝勻漿SOD、GSH-Px抗氧化酶活性；抑制血清中腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)和白細胞介素6(Interleukin-6，IL-6)的升高。阻止慢性酒精攝入對肝組織的損傷。同時，A1998能夠顯著改善慢性酒精性肝損傷大鼠的病理改變，保護肝細胞，抑制肝組織脂肪變性，延緩纖維化的發(fā)展。 (4) 建立了一種新的柱前熒光衍生高效液相色譜(High

9、 Performance Liquid Chromatography,HPLC)法測定血漿中A1998的含量，該方法使A1998的定量限從普通HPLC法的2 μg/ml降到了25 ng/ml。經(jīng)方法學驗證，該法靈敏、快速且重現(xiàn)性好，進一步運用于大鼠尾靜脈注射4mg A1998 SD/kg大鼠后藥代動力學參數(shù)測定，用中國藥理學會3P97軟件計算所得，平均的消除、穩(wěn)定態(tài)分布體積和排出半衰期分別為50.3±1.1ml/min·kg、1329.

10、0±111.0mg/kg和44.0±2.7 min。該方法可應用于A1998的實驗動物組織分布、P450酶代謝產(chǎn)物以及細胞代謝產(chǎn)物研究。綜上所述，本論文通過制備SD成功提高了新化合物A1998的溶解度和體外溶出度；藥效實驗證明A1998的SD抗體外自由基和氧化性肝損傷以及動物實驗性肝損傷效果非常好；柱前熒光衍生HPLC法測定可準確定量生物樣品中微量的A1998。這一系列問題的解決，為能進一步將新化合物A1998開發(fā)為治療肝病的新藥創(chuàng)造了