體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化.pdf

1、目的：(1)通過體外分離、培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)，觀察其生物學(xué)特性；(2)對培養(yǎng)的hMSCs行體外藥物誘導(dǎo)，促其向心肌樣細(xì)胞分化。 方法：采用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液分離人骨髓單個(gè)核細(xì)胞，所獲取的細(xì)胞置于含10％胎牛血清的L-DMEM中培養(yǎng)，通過傳代獲得純度較高的hMSCs，應(yīng)用流式細(xì)胞儀鑒定hMSCs。在第四代傳代時(shí)加入5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L 5-雜氮胞苷對hMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)，24h

2、后更換為完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。分別在誘導(dǎo)后第2～8W利用結(jié)蛋白抗體、心鈉素抗體以及閏盤蛋白抗體進(jìn)行免疫組化染色，并于第2～4W利用超薄切片透射電鏡觀察誘導(dǎo)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：(1)以Ficoll分離液分離人骨髓單個(gè)核細(xì)胞，同時(shí)利用hMSCs貼壁生長的特性，可以有效獲得hMSCs。(2)hMSCs具有很強(qiáng)的自我復(fù)制能力，并能夠在連續(xù)的體外培養(yǎng)過程中保持未分化狀態(tài)。(3)hMSCs具有多向分化潛能，在體外利用5-雜氮胞苷可以誘導(dǎo)h