MG132抑制人晶狀體上皮細胞增殖、移行和分化的實驗研究.pdf

1、目的：通過體外細胞培養(yǎng)研究蛋白酶體抑制劑MG132對HLEC增殖、移行和分化的抑制作用，初步探索MG132防治后發(fā)性白內(nèi)障的機制。
　　 方法：
　　 1、采用組織塊培養(yǎng)法，對人晶狀體前囊膜進行培養(yǎng)，并利用形態(tài)學觀察和體外培養(yǎng)HLEC特異性的“晶狀體小體”進行細胞鑒定。
　　 2、MTT比色法：傳代的HLEC分別加入FGF-2(10ng/ml)；MG132(10μM)；MG132+FGF-2(FGF-2，10ng

2、/m1；MG132，10μM)并作對照，培養(yǎng)24h后以MTT法測定吸光度(OD)值，計算其增生率。
　　 3、移行能力測定：傳代的HLEC分別加入FGF-2(10ng/ml)；MG132(10μM)；MG132+FGF-2(FGF-2，10ng/ml；MG132，10μM)并作對照，用無菌棉棒在細胞層中劃出細胞裸露區(qū)，培養(yǎng)24h后對行至裸露區(qū)的細胞計數(shù)，計算移行能力。
　　 4、細胞免疫組化法：收集傳代的HLEC分別加入

3、TGF-β2(10ng/ml)；MG132(10μM)；MG132+TGF-β2(TGF-β2，10ng/ml；MG132，10μM)并作對照，培養(yǎng)24h后免疫組化檢測胞漿中FN的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1、HLEC原代培養(yǎng)中，細胞接種后24h內(nèi)，即有部分上皮細胞自囊膜片生長移出，貼壁生長。長期培養(yǎng)的HLEC中，可觀察到細胞呈同心圓環(huán)繞的小球體狀結(jié)構(gòu)，即體外培養(yǎng)LEC特征性的“晶狀體小體”。
　　 2、10n

4、g/mlFGF-2能誘導HLEC增殖24.2％；10μM的MG132能夠有效抑制HLEC增殖，增殖率為-25.4％且能夠有效抑制FGF-2誘導的HLEC增殖，增殖率為-20.1％。MG132+FGF-2組和FGF-2組對HLEC的作用有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3、10ng/mlFGF-2能誘導HLEC移行，移行能力為33.6％，10μM的MG132能夠強有效地抑制FGF-2誘導HLEC的移行作用。MG132+FGF-

5、2組和FGF-2組對HLEC的作用有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4、TGF-β2組可見HLEC胞漿中多量黃褐色沉積物；而MG132+TGF-β2組FN的表達明顯下降，與對照組相比無明顯差異；MG132組接近對照組。
　　 結(jié)論：1.本實驗成功地進行了HLEC的體外培養(yǎng)，獲得了高純度的HLEC細胞，可以作為后發(fā)障的細胞學研究的實驗對象。2.無論FGF-2、TGF-β2存在與否，MG132能強有效抑制HLEC增殖、移