人canstatin基因轉(zhuǎn)染對體外卵巢癌HO-8910PM及SKOV-3細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名I縊I壘耋日期：2紀蘭：【￡中國

2、醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論

3、文作者簽名：型查莖指導(dǎo)教師簽名：至出：量2日中文論著摘要人canstatin基因轉(zhuǎn)染對體外卵巢癌HO8910PM及SKOv3細胞增殖與凋亡的影響目的canstatin是新近發(fā)現(xiàn)的一種血管生成抑制因子，本試驗將以人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC作為對照，研究canstatin在體外對卵巢癌細胞HO8910PM，SKOV3生物學(xué)行為(增殖于凋亡)是否有影響。方法委托專業(yè)生物公司人工合成人canstatin基因片段，經(jīng)DNA測序證實后，將攜帶目的基

4、因片段的質(zhì)粒PUC57和大腸桿菌交由慢病毒構(gòu)建公司，委托其構(gòu)建并包裝出帶有綠色熒光蛋白基因GFP的慢病毒LecanGFP，同時包裝不含目的基因的空載體病毒LeGFP作為對照。用人canstatin基因重組慢病毒載體LecanGFP感染人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC，卵巢癌細胞HO8910PM，SKOV3，借助GFI的熒光表達觀察細胞轉(zhuǎn)染情況。感染成功后，RealtimePCR法檢測HUVEC細胞及卵巢癌細胞中目的基因canstatinmRN

5、A的表達。通過MFr法及流式細胞學(xué)技術(shù)研究canstatin對上述細胞生物學(xué)行為的影響。結(jié)果用重組慢病毒載體LecanGFP感染人臍靜脈細胞HUVEC及卵巢癌細胞系HO8910PM，SKOV3，當(dāng)病毒的最適感染復(fù)數(shù)(MOI)為20時，熒光顯微鏡下可以觀察到大部分細胞發(fā)出綠色熒光。故后續(xù)實驗中，各細胞系中加入MOI為20的慢病毒。RealtimePCR法證實，canstatin基因成功的轉(zhuǎn)入HUVEC，HO8910PM及SKOV3細胞。M