SEA0400對大鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 探索一種新型的Na+／Ca2+交換蛋白抑制劑SEA0400對離體大鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法： 本課題利用酶解法分離成年Wistar大鼠心臟獲得心肌細(xì)胞懸液，將分離所得細(xì)胞懸液隨機(jī)分成3組進(jìn)行研究。(1)正常細(xì)胞培養(yǎng)組：正常條件下培養(yǎng)60min，未經(jīng)過缺血再灌注過程，作為正常對照組；(2)缺血再灌注損傷組(I／R組)：心肌細(xì)胞模擬缺IZ30min，再灌注30min，模擬缺血再灌注損

2、傷過程；(3)SEA0400干預(yù)組：在心肌細(xì)胞模擬缺血再灌注損傷的基礎(chǔ)上，給予不同濃度的SEA0400(O．1、1、10gmol／L)進(jìn)行干預(yù)。用MTT比色試驗(yàn)檢測心肌細(xì)胞活力；應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)技術(shù)，測定在缺血再灌注過程中不同時(shí)間心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度，以熒光強(qiáng)度變化反映心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化，以鈣變化率作為指標(biāo)比較不同濃度SEA0400對心肌的保護(hù)作用。 結(jié)果： 1．心肌細(xì)胞活力檢測：I／R

3、組的細(xì)胞活力較正常細(xì)胞培養(yǎng)組明顯減一弱(P<0．01)；不同濃度SEA0400干預(yù)組的細(xì)胞活力較正常細(xì)胞培養(yǎng)組明顯減弱(P<0．01)，但比I／R組明顯增強(qiáng)(P<0．01)；1grnol／LSEA0400干預(yù)組的細(xì)胞活力較O．11zmol／LSEA0400干預(yù)組明顯增強(qiáng)(P<0．01)，1pmol／LSEA0400干預(yù)組的細(xì)胞活力與10pmol／LSEA0400干預(yù)組比較無差異(p>0．05)，因此SEA0400保護(hù)缺血再灌注損傷心肌細(xì)

4、胞活力的較好濃度為1grnol／L。 2．心肌細(xì)胞Ca2+熒光強(qiáng)度檢測：I／R組心肌細(xì)胞在模擬缺血再灌注期間Ca2+熒光強(qiáng)度明顯上升，再灌注期間上升更為明顯，再灌注30min和缺血前Ca2+熒光強(qiáng)度比較有顯著差異(p<0．01)；不同濃度SEA0400干預(yù)組，再灌注30min時(shí)心肌細(xì)胞內(nèi)鈣變化率均明顯低于I／R組(p<0．01)；1gmol／LSEA0400干預(yù)組的鈣變化率明顯低于O．1pmol／LSEA0400干預(yù)組(p<0．

5、01)，1[tmol／LSEA0400干預(yù)組的鈣變化率與10gmol／LSEA0400干預(yù)組比較無差異(p>0．05)，因此在缺血再灌注期間，SEA0400能明顯減輕離體大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載的較好濃度為1pmol／L。 結(jié)論： 1．缺血期間，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度就有升高；再灌注后，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度顯著升高，再灌注30min時(shí)心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度仍繼續(xù)升高，提示心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載主要發(fā)生在再灌注期間。 2．

6、應(yīng)用Na+/Ca2+交換蛋白抑制劑SEA0400后，心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載程度明顯減輕，證實(shí)Na+／Ca2+交換蛋白在心肌細(xì)胞鈣超載中起著重要作用。 3．Na+/Ca2+交換蛋白抑制劑SEA0400在缺血再灌注期間能明顯減輕心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載，明顯提高心肌細(xì)胞活力，證明通過抑制Na+／Ca2+交換蛋白可達(dá)到良好的心肌保護(hù)作用。 4．比較三種不同濃度SEA0400對離體大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，提示1gmol／LSEA0400為較好