BKca-α、BKca-β1在妊娠期高血壓疾病胎盤小動脈平滑肌中的表達.pdf

1、 是全身小動脈痙攣,從而導(dǎo)致胎盤血流灌注減少,胎盤缺血缺氧。大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(large-conductance calcium-activated potassium channels, BKCa )是在調(diào)節(jié)血管平滑肌張力機制中發(fā)揮重要作用的一種離子通道,因此提出了BKca通道在妊娠期高血壓疾病中起血管舒張作用的觀點。本實驗通過檢測大電導(dǎo)鈣激活鉀通道α亞基(編碼基因 KCNMA1)和β1亞基(編碼基因KCNMB1)在妊娠期高血壓孕

2、婦和正常血壓(normal tension,NT)孕婦胎盤小動脈平滑肌中表達的水平,了解妊娠期高血壓疾病時大電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道的功能變化,探討大電導(dǎo)鈣激活鉀通道α亞基和β1亞基在妊娠期高血壓疾病中的作用。方法：(1)RT-PCR 實驗：①15例確診為妊娠期高血壓疾病并終止妊娠的孕婦為病例組(HDCP組),15例終止妊娠的正常孕婦為對照組(NT組),取胎盤小血管組織塊作為研究對象；②提取胎盤小動脈血管平滑肌總RNA、合成cDNA并進行P

3、CR反應(yīng)；③以β-actin為內(nèi)參基因,將目的基因和內(nèi)參基因所有PCR產(chǎn)物電泳后用凝膠成像系統(tǒng)成像并進行灰度值測定。(2)免疫印跡法(Western blot實驗)：①研究對象同RT-PCR 實驗；②首先提取胎盤小動脈血管平滑肌總蛋白,將樣品總蛋白上樣于預(yù)灌制的聚丙烯酰胺凝膠中,選擇合適電壓進行電泳,然后恒流(400mA)轉(zhuǎn)印2小時,5%脫脂奶粉中緩慢搖蕩1小時。③室溫下將膜用BKca通道α亞基、β1亞基的一抗(1：1000)進行孵育,

4、洗膜之后用羊抗兔IgG二抗(1：2000)室溫孵育1h,最后顯色成像,用Quantity-One軟件進行灰度分析,以β-actin為內(nèi)參來校正目的蛋白的相對表達量。實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)表示。采用SPSS 17.0進行配對t檢驗,P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：(1)RT-PCR技術(shù)檢測人胎盤小動脈平滑肌BKca通道KCNMA1 mRNA和KCNMB1 mRNA的表達量：HDCP組KCNMA1/β-actin比值為1

5、.0062±0.0776 (n=15),NT組是0.9938±0.1151(n=15),兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.093>0.05)；HDCP組 KCNMB1/β-actin比值為0.4180±0.0197(n=15), NT組是1.5722±0.0314(n=15),兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001<0.05),HDCP組KCNMB1基因mRNA水平低于NT組。(2)Western blot技術(shù)檢測人胎盤小動脈平滑肌B

6、Kca通道KCNMA1和KCNMB1的蛋白表達量：HDCP組KCNMA1/β-actin比值為1.0012±0.1698(n=15),NT組是1.0282± 0.1806(n=15),兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.091>0.05)；HDCP組KCNMB1/β-actin比值為0.4181±0.0808(n=15),NT組是1.6168±0.0126(n=15),兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001<0.05),HDCP組KCN