鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的:研究鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs放療抗拒性、紫杉醇敏感性及侵襲轉(zhuǎn)移能力，并在課題組前期研究基礎(chǔ)上通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)對(duì)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞生物學(xué)特性的相關(guān)性進(jìn)行初步探討。
　　方法:一、以鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs及其親本細(xì)胞CNE-2為研究對(duì)象，檢測(cè)鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞生物學(xué)特性:(1) CCK-8法、克隆形成實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞放療抗拒性;(2) CCK-8細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞

2、對(duì)紫杉醇敏感性;(3)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)及Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞體外遷移及侵襲能力。
　　二、顯微鏡觀察鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs形態(tài)學(xué)改變;Western Blot檢測(cè)鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs及親本細(xì)胞CNE-2上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物表達(dá)情況，及鼻咽癌放療前及放療后殘留組織標(biāo)本EMT分子標(biāo)志物表達(dá)水平。
　　結(jié)果:一、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs較其親本細(xì)胞具有更強(qiáng)的放療抗拒性:C

3、NE-2-Rs細(xì)胞在4Gy、6Gy和8Gy不同放射劑量下均表現(xiàn)出更高的生存率（P均＜0.01）;給予同一放射劑量，CNE-2-Rs細(xì)胞在第2天便出現(xiàn)更高的生存率（P均＜0.05），且差異隨天數(shù)逐漸增大;克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示CNE-2-Rs細(xì)胞較親本細(xì)胞形成的克隆更大、數(shù)目更多;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明，給予4Gy放射線(xiàn)照射，72小時(shí)后CNE-2-Rs細(xì)胞凋亡率明顯低于CNE-2細(xì)胞(22.43±0.18％ vs38.07±0.66％，P＜0.00

4、1);而CNE-2-Rs與親本細(xì)胞在未照射時(shí)細(xì)胞周期分布無(wú)差異，但給予4Gy放射線(xiàn)照射，72h后CNE-2-Rs細(xì)胞較親本細(xì)胞處于S期（28.78±1.72 vs21.42±1.09，P＜0.05）和G2期（37.34±3.68vs24.66±1.68，P＜0.05）細(xì)胞比例增多，處于G1期細(xì)胞減少（33.88±5.38vs53.91±1.6，P＜0.05）。
　　二、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs獲得了更強(qiáng)的紫杉醇耐藥性:C

5、NE-2-Rs和CNE-2細(xì)胞的紫杉醇藥物IC50分別為8.53±3.61×10-1及6.28±2.37×102(nM)(P＜0.001)，CNE-2-Rs細(xì)胞的紫杉醇耐藥指數(shù)為13.57±1.58。
　　三、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs獲得了更強(qiáng)的體外遷移及侵襲能力:劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞劃痕愈合能力明顯增強(qiáng);Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)顯示與親本細(xì)胞CNE-2相比，CNE-2-Rs細(xì)胞穿過(guò)T

6、ranswell小室的細(xì)胞數(shù)更多（86±6 vs26±8）(P＜0.01)。
　　四、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs及放療后殘留組織發(fā)生EMT改變:(1)放射線(xiàn)照射后CNE-2細(xì)胞失去了原本多邊形緊密相連的上皮細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞變長(zhǎng)并伴有偽足形成，細(xì)胞連接疏松，呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。提示與CNE-2相比，CNE-2-Rs細(xì)胞發(fā)生了典型的EMT形態(tài)學(xué)改變。(2)與CNE-2細(xì)胞相比，CNE-2-Rs細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadher

7、in明顯下調(diào)，而間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin明顯上調(diào)。(3)與放療前的組織標(biāo)本相比，放療后鼻咽癌殘留組織中上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)顯著下調(diào)，而相反間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin的表達(dá)則顯著升高。
　　結(jié)論:鼻咽癌放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞較其親本細(xì)胞獲得了更強(qiáng)的放療抗拒、紫杉醇耐藥及體外運(yùn)動(dòng)侵襲能力。放射線(xiàn)照射篩選放療抗拒細(xì)胞，使得最終獲得的放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞發(fā)生了典型的EMT形態(tài)學(xué)及分子標(biāo)志物改變。