鑲邊海星化學(xué)成分與生物活性研究.pdf

1、本文首次對(duì)我國南海三亞海域的鑲邊海星(Craspidaster sp.)中的皂苷類成分進(jìn)行系統(tǒng)的研究。以稻瘟霉生物活性及靶向Notch信號(hào)通路生物活性篩選模型,進(jìn)行活性追蹤,用65％EtOH對(duì)粉碎的海星進(jìn)行回流提取,減壓濃縮后均勻分散于水中,用石油醚和正丁醇進(jìn)行萃取,濃縮正丁醇得海星總皂苷。海星總皂苷粗提物通過正相硅膠、反相硅膠及葡聚糖凝膠LH-20柱層析進(jìn)行分離純化。用薄層(TLC)層析法檢測把相同的洗脫液收集在一起,得到所需要的有效

2、部位。最后通過半制備高效液相色譜對(duì)薄層層析板顯示的同一斑點(diǎn)的部分進(jìn)行純化獲得單體化合物。海星用65%EtOH提取,可將絕大部分極性較大的化學(xué)成分提取出來,然后用石油醚脫脂,再用正丁醇萃取皂苷類物質(zhì),剩余的水相部分主要是蛋白質(zhì)、糖等物質(zhì)。通過稻瘟霉生物活性篩選知海星乙醇粗提物、海星總皂苷均具有抗有絲分裂活性,而石油醚粗提物沒有顯著的活性。然后通過靶向Notch信號(hào)通路生物活性篩選模型發(fā)現(xiàn),正丁醇萃取部分對(duì)Notch信號(hào)通路有很好的抑制作用

3、,進(jìn)一步將正丁醇部分用正向硅膠柱層析進(jìn)行初步純化后,發(fā)現(xiàn)其Notch信號(hào)通路的抑制作用明顯增強(qiáng)。這進(jìn)一步說明具有Notch信號(hào)通路的抑制作用的物質(zhì)可能主要存在于正丁醇萃取部分中。同時(shí)也提示了可能海星皂苷通過抑制Notch信號(hào)通路來起到抗腫瘤。因海星皂苷類無紫外吸收或紫外吸收比較弱,為避免丟失部分皂苷類成分,我們選擇RID示差折光檢測器,色譜柱為Zorbax300 SB-C18柱(9.4mm i. d.×250 mm)的半制備型高效液相色

4、譜儀。通過用半制備型RP-HPLC對(duì)海星中皂苷類成份的分離純化條件進(jìn)行了探索,在綜合考慮高效色譜峰的保留時(shí)間、峰型、純度以及得率等因素,找到分離制備化合物最優(yōu)的色譜條件。通過最佳制備條件純化得到海星皂苷單體化合物10個(gè)。均為無色結(jié)晶性粉末,用薄層色譜(TLC)檢測,氯仿/甲醇/水(6.5:3.5:1)展開,用15%硫酸-乙醇浸潤,加熱顯褐色斑點(diǎn)。應(yīng)用現(xiàn)代波譜技術(shù)(1H,13C-NMR,DEPT,1H,1H-COSY, HMQC,HMBC

5、,TOCSY, NOESY,ESI-MS,HR-ESI-MS等)和化學(xué)手段等鑒定出其中4個(gè)海星皂苷類化合物結(jié)構(gòu),其中3個(gè)為新的化合物1個(gè)為首次從鑲邊海星中得到的化合物。3個(gè)新化合物的結(jié)構(gòu)分別為:(20R)-7-O-(6-O-methyl--β-D-galactofuranosyl)-16-O-(3-O-methyl-β-D-galactopyranosyl)-5α-cholest-8(14)-22(23)-dine-3α,6β,7β,1

6、6α-tetrol,命名為anthenoside K1(1)。(20R)-7-O-(6-O-methyl-β-D-galactofuranosyl)-16-O-(3-O-methyl-β-D-galactopyranosyl)-5α-cholest-8(14)-en-3α,6β,7β,16α-tetrol,命名為anthenoside K2(2)。(20R)-7-O-(6-O-methyl--β-D-galactofuranosyl)-

7、16-O-(3-O-methyl-β-D-galactopyranosyl)-5α-cholest-8(14)-24(28)-diene-3α,6β,7β,16α-tetrol,命名為anthenoside K3(3)。1個(gè)首次從鑲邊海星中得到的化合物為novaeguinoside A。
　　本課題首次用靶向Notch信號(hào)通路生物活性篩選模型及半制備反相高效液相色譜對(duì)我國南海三亞海域的鑲邊海星中的海星皂苷的分離純化進(jìn)行系統(tǒng)研究、報(bào)