siRNA干擾HBV陽性肝癌細胞BubR1對癌細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的:
　　siRNA干擾HBV陽性肝癌細胞BubR1對癌細胞生物學行為的影響。
　　方法:
　　1、根據基因庫中BubR1序列,由Invitrogen公司設計并提供3對不同的干擾siRNA序列。
　　2、采用RT-PCR技術檢測五株肝癌細胞(HBV陰性及HBV陽性)中BubR1 mRNA表達量最高的細胞,并且作為后續(xù)試驗研究對象。
　　3、實驗分為五組,采用westrn blot技術檢測干預BubR1表達

2、后其蛋白在肝癌細胞中的表達。
　　4、采用MTT細胞增殖實驗、平板克隆法、細胞流式實驗檢測轉染3對siRNA序列沉默BubR1基因后對細胞增殖能力、克隆形成能力、細胞凋亡以及周期的影響。
　　結果:
　　1、RT-PCR技術檢測結果顯示:BubR1 mRNA在乙型肝病毒陰性性肝癌細胞系中低于乙型肝炎病毒陽性肝癌細胞系中的表達,并且在HepG2.2.15中表達量最高。
　　2、采用Western blot技術檢測B

3、ubR1蛋白在正常組、陰性組、干預組的表達量,其結果顯示:BubR1蛋白在正常組和陰性組表達明顯高于干擾組(C、D、E)(p<0.05),差異性具有統(tǒng)計學意義,且干擾組E表達量最低。
　　3、通過MTT及克隆平板實驗檢測干擾BubR1后細胞的生長情況、增殖及侵襲能力,實驗結果顯示,干擾BubR1表達后,干擾組相比正常組及陰性組生長增殖能力受到抑制,且干擾組E抑制最明顯(P<0.05),具有統(tǒng)計學意義。另外凋亡與周期實驗結果表明,干

4、擾組與對照組(正常組及陰性組)對比,凋亡率增加,且干擾組E凋亡率最明顯(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;與正常組及陰性組相比,干擾組S、G2期細胞增加,且干擾組E增加更明顯p<0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　1、在體外干擾BubR1后其蛋白在HepG2.2.15細胞中表達量下調。
　　2、在體外干擾BubR1后,HepG2.2.15細胞株的生長、增殖以及周期受影響,具體表現(xiàn)為:MTT增殖能力減弱,凋