人微小病毒B19感染與結腸腺癌關系的初步研究.pdf

1、研究背景及目的：人微小病毒B19 感染是一個全球關注的問題，約半數(shù)的兒童和60％以上的成人血清學檢測為陽性，其感染率在美國、歐洲及亞洲相似。 大量研究表明越來越多的疾病發(fā)生與B19感染有關。研究發(fā)現(xiàn)B19在急性淋巴母細胞性白血病和髓系白血病的發(fā)病中起重要作用。該病毒基因VP1獨特區(qū)(VP1u) 的重組蛋白與人滑膜細胞孵育后可顯著上調環(huán)氧合酶-2 的表達，而后者通過促進腫瘤細胞增生、血管生成、細胞侵襲、轉移和抑制凋亡等多種途徑在

2、腫瘤的發(fā)生中起重要作用。但迄今為止幾乎沒有B19感染與實體腫瘤發(fā)病的相關性研究。本研究旨在探討該普遍感染人類的病原體—人微小病毒B19，是否在結腸腺癌中表達及其在結腸腺癌發(fā)病中可能的作用機制。 方法: 運用巢式-PCR、原位雜交和免疫組織化學方法在119 例石蠟包埋的結腸息肉、結腸腺癌、癌旁組織和正常結腸組織標本中檢測B19 病毒DNA 和蛋白。將該病毒在各組織中檢測的陽性率進行統(tǒng)計學分析；隨機選取10 例配對標本（腺癌組織和

3、其對應的癌旁組織）用于顯微切割以獲取組織成分均一的細胞，進行巢式PCR 擴增B19 DNA 并測序；免疫組化方法檢測B19 衣殼蛋白和環(huán)氧合酶-2 在37 例結腸腺癌中的表達的相關性分析；構建含VP1u 基因的四環(huán)素可誘導表達系統(tǒng)并轉染Lovo 結腸癌細胞系， western-blot 分析該基因的蛋白表達對環(huán)氧合酶-2 蛋白的影響。 結果: 運用巢式PCR 方法在各組織中檢測B19 DNA的陽性率分別為：結腸腺癌94.6％

4、(35/37)、癌旁組織67.6％ (25/37)、結腸息肉85.6％ (30/35)和正常對照60.0％ (6/10)。顯微切割結果顯示10例結腸腺癌組織中B19DNA均為陽性（10/10），而與其對應的癌旁組織內僅有3例（3/10）為陽性，進一步證實了病毒DNA主要存在于結腸腫瘤性上皮細胞內。在各組織中運用原位雜交方法檢測B19 DNA的陽性率分別為：結腸腺癌81.1％ (30/37)、癌旁組織43.2％(16/37)、結腸息肉74

5、.3％ (26/35) 和正常對照50.0％ (5/10)。B19病毒衣殼蛋白表達分別在結腸腺癌為78.4％ (29/37)、癌旁組織32.4％ (12/37)和結腸息肉57.1％ (20/35)，但是正常結腸組織內沒有一例蛋白表達陽性（0/10）。巢式PCR、原位雜交和免疫組化結果經統(tǒng)計學分析顯示B19的DNA和蛋白在結腸腺癌和癌旁組織（P = 0.012，P < 0.001，P < 0.001），腺癌和正常對照組織（P = 0.01

6、4，P = 0.017，P < 0.001）中均存在顯著性差異。巢式PCR和原位雜交檢測結果在結腸息肉和正常組織對照間僅表現(xiàn)微弱趨勢，但未見統(tǒng)計學差異（P = 0.093，P = 0.062），然而，免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)B19衣殼蛋白的表達在結腸息肉和正常對照間存在顯著性差異（P = 0.001）。對37例結腸腺癌組織中環(huán)氧合酶-2和B19衣殼蛋白VP1的表達進行相關性分析提示，環(huán)氧合酶-2和B19衣殼蛋白VP1的表達具有顯著相關性（P

7、 =0.001，κ=0.539）；將含該病毒VP1u基因的四環(huán)素可誘導表達系統(tǒng)轉染Lovo結腸癌細胞系后，在四環(huán)素誘導下，western-blot 分析顯示VP1u蛋白在第12 h后開始表達，于48 h時表達量達高峰，并且發(fā)現(xiàn)VP1u蛋白的表達可上調環(huán)氧合酶-2蛋白的表達。 結論：微小病毒B19 DNA 普遍存在于人結腸組織中，其病毒衣殼蛋白的表達主要定位于結腸息肉和腺癌組織內。B19 病毒可能通過VP1u 上調環(huán)氧合酶-2