金銀花、連翹藥對配伍的化學成分研究.pdf

1、“藥對”，又稱對藥、對子，專指臨床上相對固定的兩味中藥組成的方劑，是中藥復方配伍中最簡單、最基本和最常見的用藥形式。藥對配伍遵循中醫(yī)“七情合和”理論組合法度，具備了復方的基本功能主治，藥對是中藥配伍方法的精髓，亦是藥物組成方劑的核心，藥對配伍的研究是復方配伍規(guī)律研究的基礎和重要切入點之一：既具有復方的特性，又具有單味中藥成分相對簡單便于展開現(xiàn)代科學研究等特點。由此可見，研究中藥復方的配伍規(guī)律可從藥對著手。金銀花、連翹為抗菌消炎中藥配伍中

2、最常用的藥對。二者伍用最早出自清代吳鞠通《溫病條辨》銀翹散，現(xiàn)代制劑中，有很多口服制劑中應用了金銀花、連翹的藥對配伍。鑒于藥對對研究中藥復方的配伍規(guī)律的重要性和金銀花、連翹藥對配伍應用的普遍性，本課題選用金銀花、連翹藥對做為工具藥對進行研究，以期為進一步揭示應用金銀花、連翹的藥對配伍的現(xiàn)代制劑的物質(zhì)基礎打下良好的工作基礎。 目的： 1、對國內(nèi)外有關藥對和金銀花、連翹兩味藥材的研究文獻進行分類綜述，對目前國內(nèi)外藥對配伍以及

3、金銀花、連翹藥材的化學成分的主要研究概況加以合理分析。 2、對金銀花、連翹藥對的水提取物進行分離純化，尋找二者配伍后是否有成分上的變化?？疾旖疸y花、連翹藥對配伍對揮發(fā)油化學成分的影響。 3、以連翹苷、綠原酸和咖啡酸等有效成分的含量為指標進一步考察金銀花、連翹藥對配伍對化學成分的影響。 4、以總多糖含量和總黃酮含量等有效部位為指標初步綜合評價金銀花、連翹藥對配伍對化學成分的影響。 在上述工作基礎上探討藥對配

4、伍后發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎和作用機理，為揭示中藥復方的配伍規(guī)律，以及探究應用金銀花、連翹藥對配伍的現(xiàn)代制劑的物質(zhì)基礎提供工作基礎與理論指導。 方法： 1、以計算機檢索、手工追溯檢索等手段相結(jié)合，充分利用CA、BP、CNKI數(shù)字圖書館全文數(shù)據(jù)庫、中文生物醫(yī)學期刊文獻數(shù)據(jù)庫、互聯(lián)網(wǎng)等工具書、數(shù)據(jù)庫，廣泛查閱有關藥對配伍以及兩個單味藥材的化學成分、藥理作用以及臨床應用、現(xiàn)代制劑等資料，對藥對配伍以及金銀花、連翹藥材研究概況進行科學

5、分析。 2、采用柱色譜法，對藥對的水提物化學成分進行研究，用理化和波譜方法鑒定分離所得的化合物的結(jié)構，通過檢索文獻評價配伍是否產(chǎn)生了新物質(zhì)，得到了新成分。 3、采用氣-質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)對金銀花、連翹藥材以及藥對配伍中的揮發(fā)油進行分析，評價配伍對揮發(fā)油成分及含量的影響。 4、采用高效液相法建立快速、科學、穩(wěn)定的連翹苷、綠原酸和咖啡酸含量測定方法，并測定金銀花、連翹藥材以及藥對配伍中連翹苷、綠原酸和咖啡酸等指標成分含量，評

6、價配伍對有效成分連翹苷、綠原酸和咖啡酸含量的影響。 5、采用紫外可見比色法建立快速、科學、穩(wěn)定的總多糖、總黃酮含量測定方法，并測定金銀花、連翹藥材以及藥對配伍中總多糖、總黃酮等指標成分含量，評價配伍對有效部位總多糖、總黃酮含量的影響。 結(jié)果： 1、利用各種檢索工具、數(shù)據(jù)庫，共查閱文獻100余篇；外文文獻多集中于金銀花、連翹兩味藥材的化學成分研究，中文文獻多集中于中藥復方配伍規(guī)律的研究、藥材的質(zhì)量研究、藥理藥效及臨

7、床應用研究；通過綜述上述文獻，未發(fā)現(xiàn)有通過金銀花、連翹藥對的研究來揭示配伍規(guī)律的明確報道。 2、藥對水提物的化學成分的分離 采用柱色譜法，對藥對水提物的化學成分進行分離。到目前為止，分離得到5個單體化合物，經(jīng)理化和波譜方法鑒定其結(jié)構，分別為1，8-二羥基-3-甲基蒽醌(大黃酚)(Chrysophanol，F(xiàn)-1)、大黃素甲醚(Physcion，F(xiàn)-2)、異虎耳草素(Isopimpinellin，F(xiàn)-3)、連翹環(huán)己醇(Re

8、ngyol，F(xiàn)-4)、葡萄糖(Glucose，F(xiàn)-5)，其中F-1、F-2和F-3未見有自兩味藥材中分離得到的報道。 3、采用GC-MS對金銀花、連翹藥材和藥對揮發(fā)油的成分進行分析比較，發(fā)現(xiàn)金銀花揮發(fā)油中檢出的香葉醇、十四烷酸甲基酯、十六烷酸乙基酯、熒蒽、9，12，15-十八碳三烯酸甲基酯、亞油酸等成分和連翹揮發(fā)油中檢出的樟腦烯、α-松油烯、紫蘇醇、蒎烯、棕櫚醛、β-水茴香萜等成分在藥對揮發(fā)油中未檢出，而相對于單煎所得的揮發(fā)油，

9、藥對揮發(fā)油中新增成分有檸檬烯、異長松葉烯、十九烷等。 4、配伍對有效成分的影響 建立了簡便、科學的測定藥材連翹苷、綠原酸和咖啡酸含量的方法，分別建立了各自的標準曲線為：Y=762.357X-5.791R=0.99999)；Y=619.368X-1.640(R2=0.99998)；Y=1287.436X-23.697(R2=0.9997)。測定結(jié)果藥對中所測得的連翹苷的量高于兩味藥材單煎所得連翹苷量的直接加和；藥對測得的綠

10、原酸的量高于兩味藥材單煎所得綠原酸量的直接加和；藥對中所含的咖啡酸的量低于兩味藥材單煎所得咖啡酸量的直接加和，差異具有統(tǒng)計學意義。 5、配伍對有效部位的影響 5.1建立了快速、簡便、科學的測定藥材總黃酮含量的方法，標準曲線為Y=2.11960X(R2=0.99969)；藥對中所含的總黃酮量與兩味藥材單煎所得總黃酮量的直接加和相比，無顯著性差異。 5.2采用硫酸-苯酚法建立了快速、簡便、科學的測定藥材總多糖含量的方

11、法，標準曲線為Y=0.10788X(R2=0.99934)；藥對提取所得的總多糖量高于兩味藥材單煎所得總多糖量的直接加和。 結(jié)論： 金銀花、連翹藥對配伍對總多糖有促進溶出的作用；對總黃酮的影響不明顯，但仍可以看出配伍有促進溶出的趨勢；配伍對所提揮發(fā)油的成分和含量都有較大的影響。金銀花、連翹藥對配伍可顯著增加連翹苷、綠原酸的溶出量，但對咖啡酸則是抑制作用，減少了咖啡酸的溶出。分離工作尚未結(jié)束，完成分離工作后，活性成分的篩選