血管緊張素Ⅱ及氧化低密度脂蛋白對大鼠血管平滑肌細(xì)胞中Smad4表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過研究不同濃度的血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)對體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞中(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Smad4表達(dá)的影響,來探討影響轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信號通路的不同因素,從而進(jìn)一步探討導(dǎo)致高血

2、壓和動(dòng)脈粥樣硬化形成不同病變的作用機(jī)制,分析影響粥樣斑塊穩(wěn)定性的因素,并期望為動(dòng)脈粥樣硬化的治療找到新的靶點(diǎn)。
　　方法:取3-10代生長狀態(tài)良好的VSMCs進(jìn)行培養(yǎng),每瓶接種DMEM液5ml(含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、200mmol/L L-谷氨酰胺),待細(xì)胞貼壁生長至70％-80％融合時(shí),改用無血清的DMEM(含0.2％胎牛血清)培養(yǎng)24小時(shí),使其同步化在靜止期。然后分為五組:對照組、TG

3、F-β1作用組、AngⅡ作用組、ox-LDL作用組、AngⅡ及ox-LDL聯(lián)合作用組。按實(shí)驗(yàn)方案給予不同濃度藥物作用24小時(shí)后,采用RT-PCR和western blot方法檢測各組細(xì)胞中Smad4基因及蛋白的表達(dá)量,用ELISA法檢測各組細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原的表達(dá),最后利用SPSS13.0軟件包對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:RT-PCR和western blot檢測不同濃度TGF-β1

4、(1、5、10μg/L)作用于VSMCs后,細(xì)胞中Smad4的表達(dá)量均高于對照組(P<0.05),ELISA檢測細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原的濃度高于對照組。在這基礎(chǔ)之上,RT-PCR和western blot檢測不同濃度AngII(10-7、10-6、10-5 mol/L)作用于VSMCs后,細(xì)胞中Smad4的表達(dá)量均高于對照組(P<0.05),細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原的濃度高于對照組;不同濃度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VS

5、MCs后,80mg/L ox-LDL組同對照組相比,細(xì)胞中Smad4的表達(dá)量明顯下降(P<0.01),細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原的濃度低于對照組;以AngⅡ(10-5mol/L)聯(lián)合不同濃度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后,同AngⅡ10-5mol/L組相比,聯(lián)合組Smad4的表達(dá)量下降(P<0.05),細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原的濃度有所降低。
　　結(jié)論:(1)AngⅡ促進(jìn)大鼠VSMCs中Smad4的表達(dá)以及細(xì)胞