華貴櫛孔扇貝視黃素受體基因克隆及表達研究.pdf

1、華貴櫛孔扇貝(Chlamys nobilis)因其貝殼色彩絢麗、營養(yǎng)豐富、味道鮮美、生長快、養(yǎng)殖周期短以及經(jīng)濟效益高等眾多優(yōu)良特性，自上世紀70年代就已經(jīng)成為我國南方重要的海水養(yǎng)殖貝類。
　　華貴櫛孔扇貝的貝殼顏色通常有橙色、橙紫色和褐色等，其閉殼肌絕大多數(shù)為白色，但本課題組通過多年選育，獲得了一個貝殼和閉殼肌均為金黃色、富含類胡蘿卜素并同時能夠穩(wěn)定遺傳的新品系。目前對于該新品系富集類胡蘿卜素的機制、類胡蘿卜素的代謝以及代謝調控的

2、機制等問題目前尚未明確。
　　視黃素受體(Retinoid Receptor)，包括視黃酸受體(Retinotic Acid Receptor, RAR)和視黃素X受體(Retinoid X Receptor, RXR)，其功能主要包括調節(jié)多條代謝途徑，參與早期胚胎發(fā)育、性腺發(fā)育和生殖過程等。近年來在脊椎動物中的研究發(fā)現(xiàn)其在類胡蘿卜素的代謝中具有調控作用。
　　本文首次在華貴櫛孔扇貝克隆得到 RAR和RXR基因其部分亞型的c

3、DNA全長，并進行了同源性分析、組織表達差異分析及其與類胡蘿卜素含量關系的研究。主要結果如下：
　　1、RAR和RXR基因全長cDNA序列的克隆。結合同源克隆與RACE-PCR方法，克隆得到華貴櫛孔扇RAR(CnRAR)和RXR(CnRXR)基因的全長cDNA序列并發(fā)現(xiàn)了其中部分亞型。RAR基因包括，CnRARa全長1958 bp(不包括Ploy A尾，下同)編碼434個氨基酸殘基；CnRARb全長1901 bp，較CnRARa少

4、編碼19個氨基酸。RXR基因包括，CnRXRa全長5480 bp，編碼450個氨基酸殘基；CnRXRb較CnRXRa缺失12個堿基；CnRXRc為CnRXRa的剪接亞型，全長4728 bp，共編碼436個氨基酸殘基；CnRXRd較CnRXRc缺失12個堿基。核定位信號預測發(fā)現(xiàn)華貴櫛孔扇貝RARs和RXRs均定位于細胞核。取多個物種的視黃素基因做同源分析發(fā)現(xiàn)，華貴櫛孔扇貝RAR蛋白先與同為雙殼綱的太平洋牡蠣聚成一支，之后與其他貝類匯為一支

5、，然后與脊索動物聚類。華貴櫛孔扇貝 RXR蛋白先與同屬扇貝科的櫛孔扇貝親緣關系最近，之后與其他貝類聚為一支，然后與脊索動物聚類，但與甲殼綱和昆蟲綱進化距離較遠。
　　2、RAR和RXR組織差異表達。采用實時熒光定量PCR技術檢測華貴櫛孔扇貝 RAR和RXR mRNA在不同組織中的表達特性。結果顯示，CnRARs和CnRXRs廣泛表達于各組織中，但具有一定的組織表達特異性，CnRARs在性腺中的表達量顯著高于其他組織，在閉殼肌組織中

6、次之。而 CnRXRs則在血液中大量表達，其次為閉殼肌。
　　3、RAR和RXR與類胡蘿卜素含量關系。通過對扇貝體內(nèi)的一個重要的類胡蘿卜素吸收相關基因(清道夫受體蛋白樣基因, SRB-like-3)進行RNA干擾，研究類胡蘿卜素的變化對視黃素受體基因表達的影響。結果表明血液中CnRARs和CnRXRs的表達量隨干擾處理時間的加長和類胡蘿卜素濃度的降低而迅速上升，說明視黃素受體對類胡蘿卜素濃度變化有較為迅速的響應。
　　本研究