MiR394在植物與灰霉菌互作中的生物學功能及調控機制研究.pdf

1、植物在生長發(fā)育過程中很容易受到周圍環(huán)境的影響，由病原體灰霉菌(Botrytis cinerea)引起的番茄灰霉病是危害番茄生產的主要因素之一。根據課題組前期的研究結果顯示，miR394響應灰霉菌的感染。本研究利用過表達miR394的轉基因擬南芥和lcr突變株擬南芥，進一步明確了miR394在番茄防御灰霉病過程中的功能及其作用機制，主要研究結果如下:
　　1、用灰霉菌處理Micro-Tom番茄，在不同時間點進行樣品采集，qRT-PC

2、R結果表明，miR394參與植物對灰霉菌的防御。
　　2、為了進一步確定miR394的功能作用，我們將過表達miR394的轉基因及其靶基因lcr的突變株擬南芥接種灰霉菌。發(fā)現與野生型相比，過表達miR394的轉基因擬南芥和lcr突變株擬南芥的葉片表面均出現較大的病變面積，且綜合臺盼藍染色的結果，說明擬南芥miR394通過直接作用于靶基因LCR作為擬南芥防御灰霉菌感染的負調節(jié)劑，使得植物對灰霉菌更加敏感。
　　3、轉基因株系中

3、miR394的過表達對其它脅迫相關miRNAs產生影響。利用qPCR檢測結果顯示除miR159以外，miR156、miR168以及miR172的表達水平在各個株系中均上調，表明這些miRNAs與miR394存在潛在聯系。
　　4、對miRNA合成和作用過程中的7個相關蛋白基因在轉基因株系中進行表達檢測，其中DDL、DRB4和AGO1共3個基因的表達上調，說明miR394的過表達對這些基因具有正反饋作用。
　　5、植物中的兩條

4、激素調節(jié)途徑:茉莉酸及水楊酸途徑中的4個關鍵基因在過表達miR394的轉基因植株和lcr突變株中被檢測，高水平的miR394或低水平的LCR均導致PDF12(Plant Defensin1.2)和PR4(Pathogenesis-Relatedprotein4)表達量的增加，這可能也作為一種潛在的影響因素，使得miR394/LCR對灰霉菌感染的敏感性增強。
　　6、已有相關報道揭示miR394參與植物的非生物脅迫應答，我們對此進行