皮膚模型的構(gòu)建及在檢測藥物化妝品中的應(yīng)用.pdf

1、皮膚模型建立的方法至今已有30余年的歷史，伴隨組織工程技術(shù)的發(fā)展，建立皮膚模型已從單層表皮模型到復層皮膚替代物日趨成熟。國內(nèi)對于皮膚模型的研究尚處于起步階段，使用中國人皮膚建立替代模型，是當前的研究重點。皮膚模型按照復雜程度分為上表皮模型、真皮模型和表皮-真皮（復層皮膚）模型3種。這些體外替代模型對于體內(nèi)、體外的毒理學評價具有重要意義。本課題旨在使用原代皮膚角質(zhì)細胞和成纖維細胞構(gòu)建皮膚模型。首先，要選擇合適生物材料作支架，并配制合適化學

2、成分的培養(yǎng)基;繼而，取人體正常無病變組織，進行原代角質(zhì)細胞和成纖維細胞的分離培養(yǎng);最后，待兩種細胞達到最佳生長狀態(tài)時，接種嵌入式培養(yǎng)皿中進行氣液培養(yǎng)，以形成多層的、高度分化的器官性組織模型。進行模型驗證首先要進行HE切片、免疫組化試驗以觀察模型生長狀態(tài);第二要使用已構(gòu)建好的皮膚模型進行皮膚毒性檢測，本研究受試物為歐洲替代實驗確認中心規(guī)定的用于皮膚刺激性的物質(zhì)中選取11種化學品，使用MTT法以及ELISA法檢測皮膚模型IL-lα因子的釋放

3、量，以確定該模型的穩(wěn)定性、敏感性和準確性，逐步建立皮膚毒性動物替代試驗的方法和平臺;最后，進行皮膚模型毒性評價的應(yīng)用，選取藥物化妝品8種，以評價該體系為基礎(chǔ)，檢測其毒性。
　　 獲得主要結(jié)果包括:(1)成功構(gòu)建了2株不同年齡的成纖維細胞系;(2)使用鼠尾膠原構(gòu)建了膠原支架;(3)構(gòu)建了皮膚表皮模型;(4)HE染色和免疫組化試驗觀察模型與正常皮膚表皮相似;(5)模型驗證過程中，與動物試驗進行對比，準確率達70％;(6)在藥物化妝品