腸三葉因子對腸道急性移植物抗宿主病的保護與自噬有關(guān).pdf

1、目的:
　　觀察骨髓移植后急性移植物抗宿主疾病中自噬的表達變化以及探究預防性使用腸三葉因子對小鼠急性移植物抗宿主疾病中腸道的保護作用與自噬的關(guān)系。
　　方法:
　　用主要組織相同性抗原Ⅰ類分子不完全相合的純種近交系小鼠C57BL/6(H-2b)，BALB/C（H-2d）分別作為供鼠和受鼠，經(jīng)清髓性8.0Gy全身照射(TBI)，將供鼠的骨髓細胞和脾細胞以不同比例混合后輸入受鼠體內(nèi)，建立C57BL/6（H-2b）至BALB

2、/C(H-2d)的異基因骨髓移植(allo-BMT)，誘導急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型。將受鼠隨機分為4組，A組3只，其余每組各15只。分別為未經(jīng)任何處理的空白組（A組），單純骨髓細胞移植組（BM組），未接受ITF治療的aGVHD組(aGVHD組)以及接受ITF治療的aGVHD組（ITF組），觀察終點為小鼠死亡或者移植后第30天。定期觀察各組小鼠弓背、脫毛等aGVHD臨床表現(xiàn)，記錄小鼠體重變化、外周白細胞變化和生存情況。B組、C

3、組和D組小鼠在移植后每周的最后一天隨機處死3只，取小鼠肝臟、小腸、肺臟、脾臟做病理HE染色，另取一部分小腸組織做免疫組化，觀察自噬蛋白LC3在小腸粘膜上皮細胞內(nèi)的表達。
　　結(jié)果:
　　在aGVHD組中，小鼠在移植后10天后逐漸表現(xiàn)弓背、脫毛、體重減輕、豎毛、毛發(fā)雜亂、精神萎靡、食欲減退等典型的aGVHD臨床癥狀，以及肛周紅腫，腹瀉、血便等腸道急性GVHD表現(xiàn)，在第14天左右達到頂峰。BM組小鼠在移植后D+9天開始出現(xiàn)死亡，

4、MTS＞30，MST為26.89±2.00天，第30天存活率為82％，D+30測到白細胞總數(shù)分別為9.27±0.63，aGVHD組小鼠出現(xiàn)第一例死亡在D+6天，并在D+25天內(nèi)全部死亡，30天生存率為0，MST為17.6天，平均生存時間為19.13±2.01，最后一天測的白細胞為5.7±0.42，較BM組明顯降低(p＜0.01)。ITF組小鼠在移植后D+10天開始出現(xiàn)死亡，MTS為24，平均生存時間為23.18±2.26天，第30天存活

5、率為37％，D+30天測得白細胞為7.8±0.4，D+25天外周白細胞(7.7±0.89)較C組最后一天(D+25)的白細胞(5.29±0.42)有明顯增高，差別有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。病理HE染色顯示，aGVHD組小鼠病理顯示肝細胞嗜酸性變、匯管區(qū)淋巴細胞浸潤，膽小管壞死，肝索排列紊亂，肺泡壁充血、滲出，小腸上皮細胞脫落、壞死，大面積粘膜下層暴露，粘膜下和基底層大量淋巴細胞浸潤。aGVHD病理評分為Ⅲ-Ⅳ級，ITF組小鼠病理較C

6、組表現(xiàn)減輕，肝細胞變性減少，膽小管少量破壞，腸道上皮胞個別凋亡、壞死。評分為Ⅰ-Ⅱ。BM組和A組未出現(xiàn)急性移植物抗宿主疾病。小腸組織免疫組化顯示，除BM組以外，aGVHD組和ITF治療組在第二周LC3表達到達頂峰，在第二周之后則隨著時間推移緩慢遞減，第二周末aGVHD組LC3表達水平(226±11.1)較BM組和ITF治療組（分別為123±6.0和200±8.0）明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　aGVHD組較B

7、M組比較得出，aGVHD組表現(xiàn)出明顯aGVHD癥狀，如臨床表現(xiàn)，外周血象，病理評分等方面，這表示aGVHD模型構(gòu)建成功;aGVHD組小鼠腸道自噬蛋白LC3較未出現(xiàn)GVHD的BM組表達明顯增加，且在第二周達到頂峰，并且aGVHD嚴重程度評分也在第11-15天達到頂峰，這提示腸道自噬的嚴重程度與aGVHD有關(guān)，且自噬水平的高低與移植后aGVHD的時間有關(guān);ITF治療組小鼠自噬水平較未接受ITF治療的aGVHD組自噬水平有所下降，表明與腸三葉