新型生物相容性納米微球的制備及其siRNA遞送效率的研究.pdf

1、RNAi（RNA干擾）可以理解為由雙鏈RNA(dsRNA)靶向序列特異性調控基因表達而導致的基因沉默現(xiàn)象，是保守的基因調節(jié)機能，在細胞的發(fā)育、分裂、分化以及疾病等各種生理過程中扮演重要的轉錄后(post-transcriptional)基因調控角色。RNA干擾技術在醫(yī)學領域中具有著巨大的應用潛力。然而，目前研究出高效、新穎的遞送載體是RNAi在臨床應用上所必需的。在本文中我們利用了本實驗室在RNAi研究領域上的優(yōu)勢條件以及之前以多糖、樹

2、枝狀聚合物、脂質體為基礎制備納米顆粒的技術經(jīng)驗，在本研究中設計并合成了新型的凝膠多糖類納米微粒，基于膽固醇和基于脂質的納米微粒，并采用這三種納米微粒為傳送載體來評價siRNA的體內外傳送效率。
　　我們已合成了基于curdlan的納米微粒(6AC-100PEG)，它是通過mPEG2000與6-氨基-6-脫氧-凝膠多糖(6AC-100)相結合而成的。通過在HepG2細胞上轉染siGAPDH，發(fā)現(xiàn)此復合物能使細胞內的內源性GAPDH基

3、因的表達量明顯降低。通過在小鼠體內轉染siApoB，發(fā)現(xiàn)此復合物能將小鼠肝臟內的ApoB信使RNA(mRNA)表達水平降低。以上實驗結果表明6AC-100PEG在體內外都能有效地遞送siRNA并能誘導其RNAi效應。而且之前沒有人做過關于將以curdlan為基礎的納米微粒應用于生物治療考查其RNAi效率的研究，所以我們這個研究課題為較新穎且有其意義。
　　我們還設計了高效脂質siRNA遞送載體-DoGo3脂質復合物，它是由天然氨基

4、酸合成的新型多肽類。首先通過生物素標記的siRNA的轉染實驗發(fā)現(xiàn)，DoGo3脂質體復合物能將siRNA遞送到小鼠的肝、脾、肺等器官，還能有效地降低其載脂蛋白B(ApoB)的表達水平，根據(jù)以上這些結果我們設計了將脂質復合物應用于裸鼠上傳送肺腫瘤的新設想。以沒有任何修飾的DoGo3脂質復合物（即沒有腫瘤受體的）為轉染載體，在裸鼠體內轉染紅外標記的siRNA，發(fā)現(xiàn)此復合物能將熒光標記的siRNA遞送至肺和周圍的腫瘤中。
　　最后，我們還