真皮間充質(zhì)干細(xì)胞和心臟間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.pdf

1、畜禽種質(zhì)資源是維持生態(tài)安全、農(nóng)業(yè)穩(wěn)定的重要資源，它推動(dòng)著經(jīng)濟(jì)的繁榮與社會(huì)的進(jìn)步。重要的家養(yǎng)動(dòng)物種質(zhì)資源應(yīng)該受到重視，并得到有效的保護(hù)。間充質(zhì)干細(xì)胞可以在體外快速增殖并且可以向其他細(xì)胞分化。這些優(yōu)點(diǎn)使得它們成為畜禽種質(zhì)資源保存研究的新渠道。本實(shí)驗(yàn)以肉雞真皮來源和鵝心臟來源的間充質(zhì)干細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，在體外對(duì)細(xì)胞進(jìn)行了分離培養(yǎng)、生物學(xué)特性研究和誘導(dǎo)分化研究，并得到以下結(jié)果:
　　1.利用膠原酶Ⅰ和胰蛋白酶分離得到肉雞真皮間充質(zhì)干細(xì)胞(D

2、ermal Mesenchymal Stem Cells，DMSCs),并在體外條件下培養(yǎng)31代，細(xì)胞形態(tài)主要為長(zhǎng)梭形。RT-PCR鑒定結(jié)果顯示，細(xì)胞表達(dá)CD73、CD29、CD44，和CD71基因。免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)結(jié)果顯示肉雞DMSCs陽性表達(dá)CD105、CD90、CD73和CD44表面標(biāo)記物。通過流式細(xì)胞儀分析，CD29、CD44和CD73在肉雞DMSCs中高表達(dá)。DMSCs的生長(zhǎng)曲線為明顯的“S”形，與細(xì)胞在體外增殖的通常規(guī)律

3、基本吻合。DMSCs的群體倍增時(shí)間和克隆形成能力的結(jié)果表明細(xì)胞的增殖能力隨著代次的升高而減弱。研究表明肉雞DMSCs能夠在一定的條件下被分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，通過特異性染色和RT-PCR鑒定證明肉雞DMSCs向這三種細(xì)胞成功分化。
　　2.利用膠原酶Ⅱ和胰蛋白酶分離得到鵝心臟間充質(zhì)干細(xì)胞(Heart-derived Mesenchymal Stem Cells，HMSCs)，并在體外培養(yǎng)21代，細(xì)胞形態(tài)特征呈現(xiàn)梭狀。

4、RT-PCR和免疫組化檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果都顯示細(xì)胞表達(dá)CD29，CD34，CD73，CD166和CD44等MSCs特異基因。通過流式細(xì)胞術(shù)分析，CD29，CD34，CD73，CD166和CD44在鵝HMSCs中高表達(dá)。HMSCs的生長(zhǎng)曲線表明HMSCs經(jīng)過短暫潛伏期，進(jìn)入迅速增殖的對(duì)數(shù)期，而后進(jìn)入穩(wěn)定期和衰亡期，呈現(xiàn)出明顯的“S”形，與細(xì)胞體外生長(zhǎng)的基本規(guī)律吻合。群體倍增時(shí)間結(jié)果表明HMSCs的增殖能力隨著代次的升高逐漸減弱。通過在培養(yǎng)基中加

5、入適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)因子對(duì)HMSCs進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)，通過特異性染色和RT-PCR等方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HMSCs成功被分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，說明鵝HMSCs可以向多個(gè)方向誘導(dǎo)。
　　綜上所述，本實(shí)驗(yàn)成功分離培養(yǎng)了肉雞DMSCs和鵝HMSCs，并且對(duì)它們進(jìn)行了生物學(xué)特性研究和誘導(dǎo)分化研究。結(jié)果顯示，肉雞DMSCs和鵝HMSCs均表現(xiàn)出MSCs特有的生物學(xué)特性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)畜禽種質(zhì)資源保存具有重要的意義，并