核糖體S6激酶在增生性瘢痕中的表達及意義.pdf

1、目的:研究核糖體S6激酶(ribosomalS6kinase，RSK)在人增生性瘢痕組織和正常皮膚組織中的表達情況及意義。探討其是否參與了增生性瘢痕纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程，以便為預(yù)防和治療增生性瘢痕提供新思路，并為該病的臨床有效治療提供了一定的實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1．臨床收集增生性瘢痕組織標(biāo)本14例，正常皮膚組織標(biāo)本8例，使用免疫組織化學(xué)法分別對增生性瘢痕組織和正常皮膚組織中RSK的表達水平進行檢測(Eliv

2、ison二步法)。倒置顯微鏡下觀察其在組織中的表達，隨機采取圖片，并采用Image-ProPlus6.0專業(yè)圖像分析軟件進行分析，獨立兩樣本T檢驗進行統(tǒng)計。
　　 2．臨床收集增生性瘢痕和正常皮膚組織各3例，原代細胞培養(yǎng)正常皮膚成纖維細胞和增生性瘢痕成纖維細胞，并傳代、凍存?zhèn)溆茫R下觀察成纖維細胞形態(tài)。
　　 3．使用MTT法檢測成纖維細胞的生長曲線，并根據(jù)酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光平均值，并作圖。

3、r>　　 4．取正常皮膚組織和增生性瘢痕組織培養(yǎng)出來的的第三代成纖維細胞，應(yīng)用細胞免疫熒光技術(shù)檢測細胞質(zhì)和細胞核中的RSK的表達。倒置顯微鏡下觀察其在組織中的表達，隨機采取圖片，并采用Image-ProPlus6.0專業(yè)圖像分析軟件進行分析，獨立兩樣本T檢驗統(tǒng)計。
　　 結(jié)果:
　　 1．免疫組織化學(xué)倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)兩種組織中均有RSK蛋白的表達，分布在表皮的基底細胞內(nèi)、真皮的成纖維細胞內(nèi)和毛細血管的內(nèi)皮細胞內(nèi)。且

4、在真皮乳頭層及成纖維細胞聚集處最為明顯。結(jié)果分析顯示RSK在增生性瘢痕組織(78.39±19.12)中較正常皮膚組織(29.24±10.35)中表達高。兩種組織的表達分布存在明顯差異，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2．細胞培養(yǎng)倒置相差顯微鏡下觀察正常皮膚成纖維細胞和增生性瘢痕成纖維細胞形態(tài)相似，細胞較大，呈典型的被拉長的梭形，胞漿清晰，細胞核呈類圓形或長橢圓形，胞質(zhì)向外伸出2-3個長短不等的突起。傳代后，細胞仍保持其

5、形狀.培養(yǎng)過程中細胞生長良好。
　　 3．成纖維細胞的生長曲線測定接種后第2天開始細胞數(shù)目開始增加，進入對數(shù)生長期，NFb倍增時間約3天，HFb倍增時間約5天，后細胞生長減緩，趨于平穩(wěn)，細胞生長曲線大致呈S形。
　　 4．成纖維細胞細胞免疫熒光化學(xué)人正常皮膚成纖維細胞和增生性瘢痕成纖維細胞胞核和胞質(zhì)中均含有RSK蛋白的表達，且細胞核中較細胞質(zhì)中顯色明顯。RSK在增生性瘢痕組織(20.38±13.44)中較正常皮膚組織(7

6、.46±2.21)中表達高。兩種組織的表達分布存在明顯差異，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1．RSK在增生性瘢痕和正常皮膚中均有表達，可能參與了細胞跨膜信號傳導(dǎo)。
　　 2．病理性瘢痕組織中RSK可能促進了真皮層的成纖維細胞和毛細血管內(nèi)皮細胞的過度增殖。
　　 3．RSK可能參與了增生性瘢痕纖維化的形成過程，為今后病理性瘢痕形成機制的研究提供新的思路，并為該病的臨床有效治療提供了