利用表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)快速檢測(cè)甲型副傷寒門(mén)氏菌的研究.pdf

1、目的：利用表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(surface enhancedlaser desorption& ionization time-of-flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)建立甲型副傷寒沙門(mén)氏菌蛋白指紋圖譜，并通過(guò)與分子生物學(xué)方法鑒定結(jié)果比較，驗(yàn)證其診斷效率，為快速鑒定該細(xì)菌提供新的思路。
　　方法：1.收集從臨床中分離獲得的甲型副傷寒沙門(mén)氏菌36株。2.對(duì)所收集的細(xì)菌利用16

2、S rRNA測(cè)序技術(shù)進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。3.利用表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)細(xì)菌蛋白，ProteinChip和Biomarker Wizard軟件自動(dòng)采集數(shù)據(jù)，并分析所得的細(xì)菌蛋白指紋圖譜。4.對(duì)同一株細(xì)菌的蛋白進(jìn)行多次檢測(cè)并分析其蛋白指紋圖譜差異，評(píng)價(jià)方法的重復(fù)性。5.同種細(xì)菌不同株之間蛋白指紋圖譜差異進(jìn)行比較，對(duì)細(xì)菌蛋白表達(dá)的穩(wěn)定性進(jìn)行分析。6.通過(guò)比較不同培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)菌蛋白指紋圖譜差異，驗(yàn)證培養(yǎng)時(shí)間對(duì)細(xì)菌蛋白指紋圖譜的影響

3、。7。將132株菌株分成訓(xùn)練組和驗(yàn)證組，分別檢測(cè)其蛋白表達(dá)，分析其蛋白指紋圖譜，將結(jié)果用BioMarker Patterns軟件建立分類樹(shù)鑒定模型，并進(jìn)行盲法驗(yàn)證。
　　結(jié)果：1.PCR產(chǎn)物測(cè)序比對(duì)，一致性≥98.5％，鑒定為相應(yīng)的細(xì)菌該結(jié)果與傳統(tǒng)的微生物鑒定結(jié)果相符。2.在分子量3000～20000Da范圍內(nèi)，104個(gè)蛋白峰被捕獲，90個(gè)蛋白峰有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3.細(xì)菌蛋白的孔間重復(fù)性和芯片間重復(fù)性檢測(cè)好，重復(fù)檢測(cè)的

4、同一株細(xì)菌具備相似的蛋白指紋圖譜。4.同種細(xì)菌不同株之間蛋白指紋圖譜表達(dá)穩(wěn)定，共有蛋白峰分子量變異系數(shù)≤0.5％。5.細(xì)菌蛋白指紋圖譜受不同的培養(yǎng)時(shí)間影響不大。6.本研究擇優(yōu)選出質(zhì)荷比(M/Z)為10061.7的蛋白峰建立甲型副傷寒沙門(mén)氏菌的分類樹(shù)模型，甲型副傷寒沙門(mén)氏菌診斷的靈敏度和特異度通過(guò)驗(yàn)證為100％。
　　結(jié)論：使用AU蛋白芯片，采用SELDI-TOF-MS技術(shù)，可建立甲型副傷寒沙門(mén)氏菌的分類樹(shù)診斷模型，可用于快速鑒定甲