基于CysLTs通路探討三子養(yǎng)親湯控制哮喘的機制研究.pdf

1、目的：
　　基于CysLTs通路探討三子養(yǎng)親湯抑制哮喘模型小鼠哮喘癥狀的的機制
　　方法：
　　采用4-8周的C57BL小鼠65只，均為雌性，分為正常組和實驗組。正常組小鼠4只，實驗組分為中藥三子養(yǎng)親湯高中低三個組，西藥孟魯司特組，造模組。中藥組35只，西藥組5只，模型組20只，模型組分為對照組和霧化組，對照組5只。中藥組和西藥組眼球取血法取血。采用先將造模組小鼠于實驗第1天和第14天于腹腔內注射0．1％卵白蛋白生理鹽

2、水加氫氧化鋁凝膠混合液（二者比例為1:4，PH7.4）。每只小鼠注射1ml。正常組注射0.9%生理鹽水1ml。后將造模組小鼠置于自制玻璃箱內，用5%卵蛋白生理鹽水5ml進行霧化激發(fā)，每日激發(fā)1次，每次激發(fā)30min，共激發(fā)共14天。中藥組小鼠SZ-H組、SZ-M組、SZ-L組分別以10.8g/kg-1.d-1、5.4g/kg-1.d-1、2.7g/kg-1.d-1的三子養(yǎng)親湯中藥湯劑1ml灌胃(相當于成人用量的10倍、5倍、2.5倍換算

3、)，西藥組小鼠運用孟魯司特0.004g?kg-1?d-1藥量1ml進行灌胃。用HE染色法觀察肺組織，確定造模成功，并對造模小鼠的支氣管上皮細胞和平滑肌細胞進行分離。用酶聯(lián)免疫法（ELISA法）檢測小鼠肺組織勻漿中EOT-1、EOT-3的含量，小鼠平滑肌細胞中IP3和DAG的含量。逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR法）檢測小鼠平滑肌細胞中CysLTR1mRNA、CysLTR2mRNA的表達。
　　結果：
　　1、一般表現(xiàn)：正常組

4、小鼠反應靈敏，精神狀態(tài)較好，活動自如，呼吸平穩(wěn)，攝食飲水良好，皮毛有光澤，體重逐漸增加。模型組小鼠在第7天表現(xiàn)出精神不振，第14天精神狀態(tài)明顯變差，呼吸急促，動作遲緩，喜蜷縮在一起，皮毛稀疏無光澤，攝食飲水量較正常組下降，在造模后前小鼠體重基本不增加。
　　各給藥組小鼠精神較好，呼吸較平穩(wěn)，毛色光澤度良好，反應較迅速
　　病理情況:正常組：肺泡結構正常，支氣管粘膜上皮無脫落、變形，未見炎性細胞聚集于腺體增生，無炎性滲出。哮喘

5、模型組：支氣管粘膜出出現(xiàn)大量上皮細胞脫落、變形，可見大量炎性細胞聚集成團，嗜酸性粒細胞增多明顯，肺泡內聚集大量的杯狀細胞，肺泡壁變紅腫脹，肺泡壁變薄，個別肺泡腔擴大。
　　3、CysLTR1mRNA和CysLTR2mRNA：與模型組相比，西藥組，中藥中劑量組小鼠細胞中白三烯1基因表達降低，具有顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.05），中藥高劑量組小鼠細胞中白三烯1基因表達明顯降低，具有非常顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.01），提示，西藥組，中

6、藥高劑量組，中藥中劑量組所使用的藥物或治療方法具有下調小鼠細胞中白三烯1基因表達的作用；中藥低劑量組小鼠細胞中白三烯1基因表達無明顯差異，不具備統(tǒng)計學意義。與模型組相比，西藥組，中藥高劑量組，中藥中劑量組，中藥低劑量組小鼠細胞中白三烯2基因表達無明顯差異，不具備統(tǒng)計學意義。
　　4、EOT-1和EOT-3：與模型組相比，西藥組，中藥高劑量組小鼠細胞上清液中Eotaxin-1濃度明顯降低，具有非常顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.01），中

7、藥中劑量組小鼠細胞上清液中Eotaxin-1濃度降低，具有顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.05），提示：西藥組，中藥高劑量組，中藥中劑量組所使用的藥物或治療方法具有下調小鼠細胞上清液中Eotaxin-1濃度的作用；中藥低劑量組小鼠細胞上清液中Eotaxin-1濃度無明顯差異，不具備統(tǒng)計學意義。與模型組相比，西藥組，中藥高劑量組小鼠細胞上清液中Eotaxin-3濃度明顯降低，具有非常顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.01），中藥中劑量組小鼠細胞上清液中

8、Eotaxin-3濃度降低，具有顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.05），提示：西藥組，中藥高劑量組，中藥中劑量組所使用的藥物或治療方法具有下調小鼠細胞上清液中Eotaxin-3濃度的作用；中藥低劑量組小鼠細胞上清液中Eotaxin-3濃度無明顯差異，不具備統(tǒng)計學意義。
　　5、IP3和DAG：與模型組相比，西藥組，中藥高劑量組小鼠細胞上清液中IP3濃度明顯降低，具有非常顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.01），中藥中劑量組小鼠細胞上清液中IP3

9、濃度降低，具有顯著的統(tǒng)計學意義（p<0.05），提示：西藥組，中藥高劑量組，中藥中劑量組所使用的藥物或治療方法具有下調小鼠細胞上清液中IP3濃度的作用；中藥低劑量組小鼠細胞上清液IP3濃度無明顯差異，不具備統(tǒng)計學意義。與模型組相比，西藥組，中藥高劑量組，中藥中劑量組中藥低劑量組小鼠細胞上清液DAG濃度無明顯差異，不具備統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1、三子養(yǎng)親湯能降低哮喘小鼠模型肺組織勻漿中EOT-1和EOT-3的含量。