柴胡多糖對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣綜合征的防治作用及其對(duì)小鼠免疫功能的影響.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種累及多系統(tǒng)的自身免疫病,臨床表現(xiàn)復(fù)雜。其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,患者最終出現(xiàn)機(jī)體防御能力崩潰和腎功能不全,嚴(yán)重影響著患者的生命。對(duì)于SLE的治療,目前臨床應(yīng)用研究的是以環(huán)磷酰胺為代表的細(xì)胞毒藥物和免疫抑制劑,盡管此類(lèi)藥物能控制病情,但其選擇性差,長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)降低機(jī)體的防御機(jī)能,產(chǎn)生多種并發(fā)癥和副作用。故篩選新的、毒副作用小的防治藥物有重要的意義。<

2、br>　　 補(bǔ)體與SLE病理?yè)p傷密切相關(guān),其可能的作用機(jī)制包括:在機(jī)體清除能力受損的情況下過(guò)多的免疫復(fù)合物,可誘導(dǎo)補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活。補(bǔ)體活化成分還是SLE病理過(guò)程中調(diào)節(jié)細(xì)胞因子產(chǎn)生,參與炎癥反應(yīng)的重要成分。補(bǔ)體抑制劑已成為近十年國(guó)外新藥開(kāi)發(fā)研究中的熱點(diǎn),我國(guó)藥用植物資源豐富,從中獲得具有補(bǔ)體抑制作用的免疫調(diào)節(jié)劑是完全可行的,并且可以用于治療SLE。
　　 柴胡是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥和常用中藥,包括傘形科多年生草本植物柴胡(北柴胡)B

3、upleurum chinensis DC.和狹葉柴胡(南柴胡)Bupleurum seorzonerifolium Willd,具有抗炎、治療腎病和自身免疫病的作用。小葉黑柴胡分布于我國(guó)的西北地區(qū),在過(guò)去的研究中,我們從小葉黑柴胡根部提取出的柴胡多糖,離體研究顯示出顯著的抗補(bǔ)體活性。鑒于補(bǔ)體過(guò)度激活與SLE的密切關(guān)系,我們采用SLE樣綜合征小鼠模型,初步觀察了從小葉黑柴胡根部提取出的柴胡多糖對(duì)補(bǔ)體相關(guān)疾病——SLE樣綜合征的藥效;并在

4、后續(xù)研究中初步研究了柴胡多糖的其他免疫調(diào)節(jié)作用。
　　 1柴胡多糖對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣綜合征小鼠的作用
　　 目的探討柴胡多糖對(duì)紅斑狼瘡樣綜合征模型小鼠的防治作用。
　　 方法Day0,用含空腸彎曲菌(CJ-S131)懸液的完全福氏佐劑免疫BALB/c小鼠,Day14再用空腸彎曲菌懸液加強(qiáng)免疫一次,誘發(fā)小鼠紅斑狼瘡(SLE)樣綜合征;Day0-34,醋酸潑尼松(Prednisone 5mg·kg-1·d-1)、柴胡

5、多糖(Bupleurum polysaccharides,BPs15、30 mg·kg-1·d-1)灌胃給藥。觀察柴胡多糖對(duì)空腸彎曲菌CJ-S131誘導(dǎo)的小鼠紅斑狼瘡樣綜合征的藥效。檢測(cè)內(nèi)容包括ELISA法檢測(cè)小鼠血清中總IgG、抗dsDNA抗體、抗ssDNA抗體、抗組蛋白抗體水平;通過(guò)溶血實(shí)驗(yàn)測(cè)定血清總補(bǔ)體水平;硝酸還原酶法檢測(cè)血清亞硝酸鹽水平以反映血清NO的水平;考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)小鼠尿蛋白;光鏡下觀察藥物對(duì)腎臟病理改變的影響;通過(guò)腎

6、石蠟切片免疫組化染色(IgG),觀察免疫復(fù)合物在腎小球的沉積情況;采用Image J圖像分析軟件對(duì)腎臟病理?yè)p傷情況進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果柴胡多糖對(duì)體重及臟器指數(shù)的影響
　　 Day14加強(qiáng)免疫后,與正常對(duì)照(生理鹽水免疫)和模型對(duì)照組(完全弗氏佐劑免疫)相比,模型組(CJ-S131+完全弗氏佐劑免疫)小鼠的體重顯著降低(P＜0.05.Day15-29)。柴胡多糖30mg·kg-1·d-1顯著改善這種體重下降(P＜0.05

7、,day15-18)。潑尼松長(zhǎng)期給藥能引起小鼠的體重顯著降低(與正常組相比,P＜0.001,day35)。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠的脾臟、胸腺指數(shù)均顯著升高(P＜0.05)。柴胡多糖30mg·kg-1·d-1顯著抑制小鼠脾腫大(p=0.008)。醋酸潑尼松5mg·kg-1·d-1對(duì)模型小鼠的脾臟、胸腺指數(shù)也有顯著降低作用(P＜0.001),脾指數(shù)甚至低于正常小鼠(P＜0.001)。
　　 柴胡多糖對(duì)抗自身抗體和總IgG水平的

8、影響
　　 Day35,與正常對(duì)照和模型對(duì)照組相比,模型組小鼠的抗dsDNA、ssDNA和組蛋白抗體明顯升高(P＜0.001)。與模型組相比,柴胡多糖30mg·kg-1·d-1和醋酸潑尼松5mg·kg-1·d-1對(duì)三種抗自身抗體的升高有顯著改善(P＜0.01)。柴胡多糖15mg·kg-1·d-1能顯著抑制血清抗ssDNA、抗組蛋白抗體水平(P＜0.001)。與正常組相比,模型對(duì)照組及模型組小鼠的血清總IgG水平顯著升高(P＜0.

9、001)。柴胡多糖和醋酸潑尼松顯著抑制了總IgG的升高(P＜0.05)。
　　 柴胡多糖對(duì)血清總補(bǔ)體及NO水平的影響
　　 實(shí)驗(yàn)各組間,血清總補(bǔ)體活性無(wú)差異。與正常組相比,模型組小鼠的血清NO水平顯著升高(P＜0.05),柴胡多糖及醋酸潑尼松給藥對(duì)此無(wú)顯著影響。
　　 柴胡多糖對(duì)腎損傷的影響
　　 與正常和模型對(duì)照組相比,模型組小鼠的尿蛋白水平顯著增高(P＜0.01):柴胡多糖15、30mg·kg-1·d

10、-1及醋酸潑尼松5mg·kg-1·d-1明顯抑制病變小鼠尿蛋白水平的升高(P＜0.05)。
　　 光學(xué)顯微鏡下觀察到:所有模型小鼠都有顯著的腎損傷,有明顯的腎小球系膜細(xì)胞增生,系膜增厚,腎小球腫脹現(xiàn)象。此類(lèi)改變?cè)谡＝M和模型對(duì)照組未見(jiàn)。柴胡多糖30mg·kg.d-1及醋酸潑尼松5mg·kg-1·d-1明顯改善腎損害(P＜0.01,病理報(bào)告評(píng)分)。
　　 腎石蠟切片免疫組化(IgG)染色結(jié)果顯示:模型小鼠的腎小球內(nèi)有大量免

11、疫復(fù)合物的沉積(黃色區(qū)域),而正常和模型對(duì)照組未見(jiàn)。柴胡多糖15、30mg·kg-1·d-1及醋酸潑尼松5mg·kg-1·d-1明顯減少免疫復(fù)合物沉積(P＜0.001),(ImageJ圖像分析軟件處理結(jié)果)。
　　 2柴胡多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響
　　 目的:研究柴胡多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響。
　　 方法:將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照藥組、柴胡多糖2個(gè)劑量(40、20mg·kg-1)組,灌胃給藥。檢測(cè)藥物對(duì)

12、綿羊紅細(xì)胞(SRBC)誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響;測(cè)定小鼠T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能;檢測(cè)藥物對(duì)小鼠血清溶血素水平的影響:中性紅比色法測(cè)定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(Mφ胞飲功能,硝酸還原酶法測(cè)定巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清一氧化氮(NO)水平。
　　 結(jié)果:柴胡多糖40mg·kg-1顯著抑制遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(P＜0.05)。柴胡多糖20mg·kg-1顯著增強(qiáng)腹腔Mφ胞飲能力(P＜0.05);顯著升高血清溶血素水平(P＜0.001),柴胡多糖刺激脾淋巴