附骨癰的病灶清除術的范圍界定及臨床運用.pdf

1、目的:
　　 建立鈦板和死骨表面的金黃色葡萄球菌的生物膜體外模型;探討所建立的模型用于研究同種細菌在不同異物表面的生物膜形成能力的可行性,從而對用于治療慢性骨髓炎的病灶清除術的清除范圍進行初步界定;獲得金黃色葡萄球菌的生物膜的斷層圖像并觀察其形態(tài)結構;制作金黃色葡萄球菌的生物膜的三維重建圖像并觀察其形態(tài)結構;比較金黃色葡萄球菌在鈦板和死骨表面的生物膜形成能力。
　　 方法:
　　 將Unnanuntana的置片培

2、養(yǎng)法進行改良。取少量斜面保種的X409型金黃色葡萄球菌,接種于胰蛋白胨大豆肉湯中,經(jīng)過3次分離純化培養(yǎng)后得到純種菌液,調(diào)整菌液濃度達到106CFU/ml,準備實驗。實驗前,將經(jīng)過滅菌處理的10片鈦板和10片死骨用磷酸鹽緩沖液浸泡4h。再將其隨機分成10組,每組準備1個無菌細胞培養(yǎng)瓶,每個細胞培養(yǎng)瓶中加入20ml胰蛋白胨大豆肉湯、5μl菌懸液、1片鈦板和1片死骨,置恒溫箱中培育。于培育第24h形成穩(wěn)定的生物膜時,將10個無菌細胞培養(yǎng)瓶中的

3、鈦板和死骨全部取出用于激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察。按試劑盒說明進行標本染色,立即在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察及拍照,計算生物膜厚度及各層的活菌百分率。
　　 從2009年2月～2010年2月,運用兩種清除范圍不同的病灶清除術配合托里消毒散對68例慢性骨髓炎患者進行治療。
　　 結果:
　　 1.生物膜是具有高度組織化的多細胞群體結構。在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察到的生物膜由紅色、綠色和黃色熒光組成,其中紅色熒光為

4、死細菌,綠色為活菌,黃色為死菌與活菌相疊加而成。底層的活菌比中層的少。
　　 2.生物膜是相互聚集成團塊狀的多聚物。在生物膜團塊里,死菌大多在外面,活菌大多包裹在中間。
　　 3.于金黃色葡萄球菌培育第24h形成穩(wěn)定生物膜時,鈦板和死骨的生物膜厚度分別為(39.20±:4.26)μm和(44.70±4.22)μm,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。鈦板和死骨的底層活菌百分率分別為(52.20±5.45)％和(57.30±

5、4.92)％,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4.于金黃色葡萄球菌培育第24h形成穩(wěn)定生物膜時,鈦板表面的中層和底層活菌百分率分別為(81.50±10.46)％和(52.20±5.45)％,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。死骨表面的中層和底層活菌百分率分別為(85.50±6.42)％和(57.30±4.92)％,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 5.死骨清除徹底的觀察組遠期療效優(yōu)于保留死骨的對

6、照組。
　　 結論:
　　 1.本實驗所建立的鈦板和死骨表面的金黃色葡萄球菌的生物膜模型可用于研究同種細菌在不同異物表面的生物膜形成能力。
　　 2.金黃色葡萄球菌在死骨表面的生物膜形成能力比鈦板強。
　　 3.對于有死骨形成的附骨癰,在治療時除了需將鈦板取出外,更應注意死骨的處理。
　　 4.在生物膜里,中層活茵百分率比底層活菌百分率高,底層的活菌的新陳代謝可能比中層的慢。在生物膜里,活菌大多被