子癇前期患者母血及胎盤組織中HtrA4、Syncytin-1的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：子癇前期（Preeclampsia，PE）是妊娠期特有的疾病，嚴(yán)重危害母兒健康。全球發(fā)病率為3-8％，且各地區(qū)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。子癇前期的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，研究發(fā)現(xiàn)其與細(xì)胞凋亡、血管痙攣，凝血系統(tǒng)激活，炎癥反應(yīng)等密切相關(guān)，而這些病理變化集中表現(xiàn)為胎盤的異常。多數(shù)研究認(rèn)為，子癇前期的病理變化起始于胎盤“淺著床”和胎盤血管重鑄障礙。研究證實(shí)多種胎盤來源的蛋白因子的表達(dá)異常參與子癇前期胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的功能，如可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)

2、因子、胎盤生長(zhǎng)因子、HtrA家族、合胞素等，但極少數(shù)被認(rèn)為是子癇前期病情嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)指標(biāo)。其中，HtrA4又稱高溫需求蛋白4，是絲氨酸蛋白酶家族成員之一，其分子量為51kDa。高溫時(shí)作為蛋白酶降解折疊錯(cuò)誤的周質(zhì)蛋白，低溫時(shí)顯示蛋白質(zhì)分子伴侶功能，研究表明HtrA4參與胎盤發(fā)育，被認(rèn)為是早發(fā)型子癇前期可能的預(yù)測(cè)指標(biāo)。而Syncytin-1是由人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄缺陷病毒(HERV）家族成員HERV-W編碼的包膜蛋白，其分子量為33kDa。高度

3、表達(dá)于胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞層，介導(dǎo)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的融合分化，對(duì)胎盤發(fā)育具有重要意義。有研究發(fā)現(xiàn)HtrA4通過其PDZ結(jié)構(gòu)域與Syncytin-1的SU亞單位結(jié)合，抑制了滋養(yǎng)細(xì)胞之間的融合、分化，造成胎盤淺著床，引發(fā)子癇前期。本研究從檢測(cè)母血及胎盤組織中HtrA4和syncytin-1的含量變化及其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性角度進(jìn)行研究，探討其對(duì)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞融合、分化的影響，進(jìn)而加深對(duì)子癇前期發(fā)病機(jī)制的了解，并指導(dǎo)臨床診斷和治療。
　　方法：⑴按

4、照《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》中重度子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)選取2014.02至2015.05于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院產(chǎn)前檢查和住院的重度子癇前期患者74例，發(fā)病孕周<34周的早發(fā)型子癇前期（Early-onset preeclampsia，E-PE）組39例，>34周的晚發(fā)型重度子癇前期（Late onset severe preeclampsia，LS-PE）組35例，同期隨機(jī)選取33例健康孕婦作為對(duì)照組。⑵所有研究對(duì)象在終止妊

5、娠前3天內(nèi)應(yīng)用彩色多普勒超聲檢測(cè)臍動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)：收縮期峰值流速與舒張末期血流速度之比（S/D）、搏動(dòng)指數(shù)（PI）及阻力指數(shù)（RI）。收集所有研究對(duì)象分娩前母血3ml，離心，取上清液，置于-70℃冰箱保存，待測(cè)。胎盤娩出后立即取胎盤母面近臍帶根部直徑3cm范圍內(nèi)的組織，約l x l x lcm大小，生理鹽水沖洗后至10％福爾馬林溶液中室溫固定48h以上，然后進(jìn)行脫水、石蠟包埋等。⑶采用彩色多普勒超聲測(cè)定臍血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)S/D、PI、

6、RI；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)母體血漿 HtrA4和 Syncytin-1的表達(dá)水平；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)（Immunohistochemistry，IHC）顯微鏡下觀察胎盤中HtrA4和Syncytin-1的表達(dá)分布；軟件進(jìn)行圖像分析得出平均光密度值（Mean optical Density，MOD）。⑷采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用 SNK檢

7、驗(yàn)。兩變量之間的相互關(guān)系采用 Pearson直線相關(guān)性分析。取α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：①子癇前期患者臍動(dòng)脈血流S/D、PI、RI值升高，與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。早發(fā)組S/D值顯著高于晚發(fā)組和對(duì)照組（均P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；早發(fā)組PI值及RI值顯著高于晚發(fā)組，且晚發(fā)組高于對(duì)照組（均P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；②子癇前期患者血漿中HtrA4表達(dá)升

8、高，而Syncytin-1表達(dá)降低，與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。早發(fā)組HtrA4表達(dá)水平顯著高于晚發(fā)組，且晚發(fā)組高于對(duì)照組（均P<0.05）。早發(fā)組Syncytin-1表達(dá)水平明顯低于晚發(fā)組，且晚發(fā)組低于對(duì)照組（均P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；③HE染色結(jié)果：正常妊娠胎盤可見絨毛成熟良好，形態(tài)飽滿，間質(zhì)少，絨毛及絨毛間質(zhì)的血管豐富，形態(tài)正常，合體滋養(yǎng)層細(xì)胞核排列較整齊；子癇前期患者胎盤絨毛成熟不良，絨毛血管平滑

9、肌數(shù)量減少，可見玻璃樣變，間質(zhì)水腫，合體滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞核排列紊亂；其中早發(fā)組胎盤絨毛數(shù)量更少，可見退變壞死，絨毛外層合體滋養(yǎng)層細(xì)胞大片融合；④HtrA4、Syncytin-1在子癇前期患者和正常孕婦胎盤組織中均有表達(dá)。HtrA4主要表達(dá)于胎盤絨毛小葉的合體滋養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞也有少量表達(dá)，定位于細(xì)胞膜，胞漿中也有少量表達(dá)。早發(fā)型子癇前期患者胎盤染色較晚發(fā)型子癇前期深，且二者均較正常孕婦胎盤染色深；Syncytin-1主要

10、表達(dá)于胎盤絨毛小葉的合體滋養(yǎng)細(xì)胞，定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，子癇前期患者胎盤染色較正常孕婦胎盤淺，且早發(fā)組染色淺于晚發(fā)組；⑤免疫組織化學(xué)提示HtrA4、Syncytin-1在試驗(yàn)組和對(duì)照組胎盤中均有表達(dá)。二者的表達(dá)含量在試驗(yàn)組和對(duì)照組分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：HtrA4在試驗(yàn)組 MOD值高于對(duì)照組，且早發(fā)組高于晚發(fā)組（均P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Syncytin-1在試驗(yàn)組 MOD值低于對(duì)照組，且早發(fā)組低于晚發(fā)組（均P<0.05），差

11、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；⑥母血及胎盤組織中HtrA4、Syncytin-1的相關(guān)性分析顯示二者均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.413，P<0.001；r=-0.649，P<0.01）；⑦母血及胎盤組織中HtrA4表達(dá)水平值與新生兒體重呈負(fù)相關(guān)；與臍動(dòng)脈S/D、PI、RI值均呈正相關(guān)。Syncytin-1表達(dá)水平與新生兒體重呈正相關(guān)；與臍動(dòng)脈S/D、PI、RI值呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：⑴子癇前期患者母血和胎盤組織中 HtrA4水平較正常妊娠者均明顯升高

12、，且早發(fā)組高于晚發(fā)組，而Syncytin-1水平較正常妊娠者均明顯降低，且早發(fā)組低于晚發(fā)組，提示HtrA4和Syncytin-1參與子癇前期的發(fā)病，且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。⑵子癇前期患者母血和胎盤組織中HtrA4與Syncytin-1水平均呈負(fù)相關(guān)，提示二者在子癇前期的發(fā)生發(fā)展中呈拮抗作用。⑶子癇前期患者母血和胎盤組織中HtrA4水平與新生兒出生體重、臍動(dòng)脈S/D值、PI值、RI值均呈正相關(guān)，而Syncytin-1水平與新生兒出生體重、