放創(chuàng)復(fù)合傷肉芽組織來源細(xì)胞生物學(xué)特性的實驗研究.pdf

1、放創(chuàng)復(fù)合傷是指合并有放射損傷的復(fù)合性創(chuàng)傷，其通常發(fā)生于核爆炸、核事故、放射性恐怖襲擊以及與臨床手術(shù)放療病人當(dāng)中。放射復(fù)合傷的突出特點是多種致傷因素聯(lián)合作用，顯著加重傷情，通常具有很高的致死率。相較于單純創(chuàng)傷，放創(chuàng)復(fù)合損傷傷情更加復(fù)雜并且治療難度更大，其中由于組織修復(fù)困難而成為代表性的難愈性創(chuàng)傷，是放創(chuàng)復(fù)合傷致死致殘的重要原因。
　　創(chuàng)面損傷修復(fù)是一個復(fù)雜連續(xù)的生物學(xué)過程，而復(fù)合傷組織修復(fù)不僅是單純的局部創(chuàng)面愈合過程，而且受到全身反

2、應(yīng)的影響和調(diào)節(jié)，能夠明顯的加重?fù)p傷的程度，并且延長愈合的時間。遺憾的是，在目前并沒有針對放創(chuàng)復(fù)合傷的理想的治療方法。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中在各種疾病，包括血液性、免疫疾病、嚴(yán)重?zé)齻约澳[瘤等的治療中都采用過基于干細(xì)胞的治療手段，這種特殊的治療方法為放創(chuàng)復(fù)合傷的治療也開辟了新的思路。干細(xì)胞治療在目前是一種新興的治療手段，但因其所具有的高效性和靶向性，仍具有良好的研究及治療前景。然而細(xì)胞來源成為了干細(xì)胞治療中存在的一個最突出的問題。
　　近幾十年

3、的干細(xì)胞研究從基礎(chǔ)逐漸進(jìn)入到臨床，早期結(jié)果也十分令人鼓舞。在細(xì)胞治療領(lǐng)域，我國科學(xué)家已緊緊跟上了國際前沿技術(shù)的腳步，在某些領(lǐng)域，其研究已經(jīng)達(dá)到了世界領(lǐng)先的水平。干細(xì)胞是幾乎所有的成體組織中都存在的一類具有自我更新與增殖分化能力的細(xì)胞。在目前發(fā)現(xiàn)的多種干細(xì)胞群中，胚胎干細(xì)胞在倫理方面存在著很大的負(fù)面影響，而廣受關(guān)注iPS細(xì)胞也具有一定的安全隱患，因此，成體干細(xì)胞在治療應(yīng)用中最具有可行性。自體或異體骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞是成體干細(xì)胞中在基礎(chǔ)

4、實驗和臨床中應(yīng)用最為廣泛的一種。眾所周知，淋巴造血系統(tǒng)的細(xì)胞對輻射具有很高的敏感性，在受到輻照后很容易造成致死性的傷害，這就是說，對放創(chuàng)復(fù)合傷患者來講，骨髓細(xì)胞并不是自體細(xì)胞治療中最理想的細(xì)胞來源，也說明我們急需探索其他細(xì)胞來源。
　　皮膚是人體中最大的器官，由上皮組織和和真皮組織組成，包括來源于三個胚層的多種不同的組織細(xì)胞，自我更新和再生修復(fù)速度快，是成體干細(xì)胞分離和研究的良好對象。在近幾十年來，研究者們開始越來越關(guān)注真皮細(xì)胞在

5、創(chuàng)傷修復(fù)和其他皮膚疾病中所起到的重要作用。作為最表淺的部位，我們也能通過簡易的途徑獲得大量的細(xì)胞。本課題組早在2001年就成功分離和培養(yǎng)出了大鼠真皮多能間充質(zhì)干細(xì)胞，并證明了其具有良好的自我增殖及誘導(dǎo)分化的生物學(xué)特性。目前，肉芽組織來源的細(xì)胞因其在組織修復(fù)中的重要治療效應(yīng)而被看作是一個充足的細(xì)胞來源，在近兩年的工作中我們也進(jìn)一步研究了創(chuàng)面肉芽中分離出的間充質(zhì)干細(xì)胞在創(chuàng)面治療中發(fā)揮的治療效果。由于皮膚對放射敏感性相對較低，而放創(chuàng)復(fù)合傷肉芽

6、組織來源細(xì)胞的生物學(xué)特性尚未見系統(tǒng)研究，因此，我們提出這樣一個推測，放創(chuàng)復(fù)合傷肉芽來源的細(xì)胞能夠保持良好的生物學(xué)特性，并作為重要的自體細(xì)胞移植治療的細(xì)胞來源。
　　在本課題中，我們探討了復(fù)合傷肉芽組織來源細(xì)胞的一些重要特性，其中多種涉及到放射敏感性的生物學(xué)特性由骨髓來源細(xì)胞、新生鼠真皮細(xì)胞以及單創(chuàng)肉芽組織來源細(xì)胞作為對照進(jìn)行研究。根據(jù)實驗結(jié)果我們得出以下一些結(jié)論:
　　1.放射損傷能明顯延長創(chuàng)面的修復(fù)過程，通過比較單創(chuàng)和復(fù)合

7、傷肉芽中Ki67陽性細(xì)胞和新生血管的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)延遲愈合時間大概在2～3天。
　　2.采用骨髓來源細(xì)胞作為對照評估復(fù)合傷肉芽組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)特性和自我增殖能力，發(fā)現(xiàn)骨髓來源細(xì)胞對放射損傷具有很高的敏感性，在經(jīng)照射后細(xì)胞出現(xiàn)明顯衰老損傷現(xiàn)象，而肉芽來源細(xì)胞能夠保持較好的細(xì)胞活力及體外增殖能力，提示肉芽來源細(xì)胞具有明顯的體外擴(kuò)增優(yōu)勢。
　　3.通過比較分離的復(fù)合傷肉芽來源細(xì)胞、單創(chuàng)肉芽來源細(xì)胞和新生鼠真皮細(xì)胞與干細(xì)胞有關(guān)的生物學(xué)

8、特性，發(fā)現(xiàn)放創(chuàng)復(fù)合傷肉芽細(xì)胞和另兩組細(xì)胞具有較為一致的增殖能力、遷移能力和粘附能力，雖然在集落形成和誘導(dǎo)分化能力中有一定程度減弱，但仍然保持在一個較高的水平，進(jìn)一步支持復(fù)合傷肉芽組織細(xì)胞能夠保持較好的生物學(xué)功能。
　　4.通過在創(chuàng)面局部注射分離培養(yǎng)的復(fù)合傷肉芽來源細(xì)胞，并觀察創(chuàng)面愈合、細(xì)胞定植以及創(chuàng)面瘢痕愈合情況，證明復(fù)合傷肉芽組織細(xì)胞對創(chuàng)面修復(fù)能夠發(fā)揮促進(jìn)作用。另外，配制復(fù)合傷肉芽細(xì)胞培養(yǎng)上清的條件培養(yǎng)基對細(xì)胞生長情況產(chǎn)生的影響