SCF和G-CSF聯(lián)合動員小鼠外周血培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞的生物學特性的初步研究.pdf

1、匪河瞎蓮科六蠆碩士研究生畢業(yè)論文s c F 和G ．C S F 聯(lián)合動員小鼠外周血培養(yǎng)問充質(zhì)干細胞的生物學特性的初步研究研 究 生 王東來導 師 馮建剛教授專 業(yè)二 級 學 院研究起止日期提 交 日 期外科學第四臨床醫(yī)學院2 0 0 4 年9 月2 0 0 6 年3 月2 0 0 6 年3 月中文摘要對照，兩組均采用密度梯度離心結合貼壁法篩選M S C 。用含1 5 ％胎牛血清的低糖D M E M 培養(yǎng)液培養(yǎng)，4 8 小時后首次換液，去

2、除未貼壁細胞，以后3 —5 天換液一次，3 周左右傳代。取生長良好的細胞進行生長曲線測定、細胞周期檢測、貼壁率檢測、克隆形成能力檢測，并應用流式細胞分析結合免疫組化方法鑒定M S C 。同時利用含有轉(zhuǎn)化生長因子．p ( T G F ．B 1 )的高糖D M E M 培養(yǎng)液誘導第三代M S C 向軟骨細胞分化，應用免疫組化的方法檢測I I 型膠原的表達情況。結果：1 對照組無一份培養(yǎng)出M S C ，試驗組7 份成功培養(yǎng)出M S C 。原代

3、M S C 首次傳代時間為4 周左右，細胞形態(tài)趨向于多角形，傳代之后細胞生長速度明顯增快，經(jīng)過3 —5 天的潛伏期后，出現(xiàn)5 ．7 天的對數(shù)生長期，而后進入平臺期，約3 周左右傳代，細胞呈均勻分布的集落樣生長，形態(tài)更趨向于長梭形，細胞的均質(zhì)性明顯提高，傳至第五代時細胞出現(xiàn)老化。2 細胞周期檢測發(fā)現(xiàn)第三代的M S C 中S + G 2 + M 期的細胞占2 1 ．4 ％，G o ／G l 期的細胞約占7 8 ．6 ％，說明絕大多數(shù)細胞處于

4、靜止期。貼壁率檢測發(fā)現(xiàn)2 4 小時貼壁率達到4 5 ％，4 8小時貼壁率為8 1 ．5 ％。P o 代細胞平均細胞集落形成率為l 。2 5 ／1 0 6 ，P 】、P 3 、P 5 代細胞的平均細胞集落形成率分別為2 1 ．3 2 ％，1 6 ．1 3 ％，9 ．6 3 ％。3 7 份生長良好的第三代貼壁細胞行表面標志物檢測，流式細胞分析結果顯示表達相關的抗原標記C D 2 9 和C D 4 4 ，不表達造血細胞系的表面標志C D 3