靶向siRNA沉默WNT3基因表達(dá)對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：
　　研究通過(guò)RNA干擾（RNA interference,RNAi）技術(shù)沉默胃癌MGC-803細(xì)胞的WNT3基因，檢測(cè)WNT3基因?qū)ξ赴㎝GC-803細(xì)胞及其生物學(xué)行為的影響。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成了4組WNT3 siRNA干擾質(zhì)粒（L337、L714、L981、L1188），通過(guò)脂質(zhì)體將干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到胃癌MGC-803細(xì)胞，沉默WNT3基因，在轉(zhuǎn)染24h和48h后，分別利用實(shí)時(shí)定量PCR（Real-t

2、ime quantitative PCR）和蛋白印跡（Western blotting）檢測(cè)WNT3mRNA及蛋白的表達(dá)情況；采用Cell Counting Kit（CCK-8）法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后0h、24、48h和72h胃癌MGC-803細(xì)胞增殖活性的變化；采用粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后48h人胃癌MGC-803細(xì)胞的粘附率變化情況。用Transwell及劃痕實(shí)驗(yàn)分析轉(zhuǎn)染后48h人胃癌MGC-803細(xì)胞侵襲、遷移的影響；流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后48h胃

3、癌MGC-803細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡變化情況。
　　結(jié)果：
　　siRNA干擾質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染人胃癌MGC-803細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染效率達(dá)80％，在轉(zhuǎn)染24h和48h后，分別進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)WNT3 mRNA的表達(dá)水平和Western blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果顯示：
　　1、siRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌MGC-803細(xì)胞24h和48h后，W714與W1188干擾組MGC-803細(xì)胞中WNT3 m

4、RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平降低，與對(duì)照組比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、選取L714與L1188干擾組進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。CCK-8結(jié)果顯示，干擾組細(xì)胞的增殖明顯受到抑制；粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾組細(xì)胞的粘附水平顯著升高；Transwell及劃痕結(jié)果顯示，干擾組細(xì)胞的侵襲水平和遷移能力降低；流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示胃癌MGC-803細(xì)胞的凋亡水平顯著升高，而且干擾組細(xì)胞的細(xì)胞周期，S期比例升高，G1期比例降低，發(fā)生了S期阻滯現(xiàn)象。
　　結(jié)論

5、：
　　本研究結(jié)果顯示沉默WNT3基因后人胃癌MGC-803細(xì)胞的多種生物學(xué)行為均有改變：WNT3 siRNA干擾胃癌MGC-803細(xì)胞基因沉默效果顯著，降低了胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖速率，提高了胃癌MGC-803細(xì)胞的粘附率能力，促進(jìn)了胃癌MGC-803細(xì)胞的凋亡，影響了胃癌MGC-803細(xì)胞的細(xì)胞周期，S 期比例升高，G1期比例降低，減弱了胃癌MGC-803細(xì)胞的侵襲和遷移力WNT3基因沉默。研究結(jié)果顯示，WNT