Il-35在乳腺癌浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中表達(dá)的臨床意義及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響.pdf

1、機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)同惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。2002年Schreiber和Dunn在腫瘤免疫監(jiān)視理論的基礎(chǔ)上提出了腫瘤免疫編輯學(xué)說(shuō)(cancer immunoediting)，認(rèn)為免疫系統(tǒng)除了可以識(shí)別并清除腫瘤細(xì)胞，還具有免疫重塑功能，即對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫選擇，使免疫原性弱的腫瘤細(xì)胞進(jìn)入免疫逃逸階段，最終實(shí)現(xiàn)腫瘤進(jìn)展。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是免疫抑制中的重要一環(huán)，可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞通過(guò)免疫逃逸逃避效應(yīng)細(xì)胞的識(shí)別和殺傷，促進(jìn)腫瘤的

2、發(fā)生發(fā)展。IL-35是2007年由Collison等和Niedbala等兩個(gè)研究小組近乎同時(shí)發(fā)現(xiàn)的新型細(xì)胞因子，由IL-12的α亞基IL-12p35和IL-27的β亞基EBI3以異二聚體形式組成。IL-35是主要來(lái)源于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的抑制性細(xì)胞因子，它不僅可以直接促進(jìn)Treg分化、增殖和發(fā)揮最大免疫調(diào)節(jié)作用，還可以誘導(dǎo)產(chǎn)生新型iTR35細(xì)胞，從而級(jí)聯(lián)放大機(jī)體的免疫抑制調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，是促進(jìn)腫瘤免疫逃逸的重要因素。新近的研究證明，除了

3、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞外，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞、部分腫瘤細(xì)胞均可表達(dá)IL-35，提示IL-35同腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。在胰腺癌、直腸癌等腫瘤的研究中，可檢測(cè)到IL-35的表達(dá)，并且IL-35的高表達(dá)同不良的臨床病理因素相關(guān)。
　　第一部分 IL-35在乳腺癌浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞和血漿中的表達(dá)及其臨床意義
　　目的：
　　明確IL-35在乳腺癌患者中的表達(dá)情況，分析IL-35高表達(dá)與各臨床病理因素之間的相關(guān)性，評(píng)估IL-35表達(dá)與患者預(yù)后轉(zhuǎn)歸

4、的關(guān)聯(lián)及能否作為乳腺癌新的生物標(biāo)記物。
　　方法：
　　入組2008年01月至2010年05月行手術(shù)切除的、具有完整隨訪資料的女性乳腺癌患者110例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)乳腺癌組織中IL-35表達(dá)情況，探討IL-35表達(dá)同乳腺癌TNM分期、ER、PR、HER-2表達(dá)及無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)、總生存期(OS)的關(guān)系。
　　入組2014年03月至2014年12月確診的乳腺癌患者60例及健康對(duì)照30例，應(yīng)用ELISA方法

5、檢測(cè)乳腺癌患者血漿中IL-35表達(dá)情況，探討IL-35表達(dá)同乳腺癌TNM分期、ER、PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67及分級(jí)的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　在乳腺癌組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)IL-35表達(dá)，110例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中，IL-35高表達(dá)者19例，占17.3％，低表達(dá)者48例，占43.6％，不表達(dá)者43例，占39.1％，IL-35在腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中的表達(dá)水平在年齡大于50歲、術(shù)后病理分期Ⅲ期、腫塊大于2cm

6、及ER陰性患者中顯著升高(p＜0.05)。Kaplan-Meier生存分析顯示，腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞高表達(dá)IL-35的腫瘤患者組PFS和OS較低表達(dá)組顯著縮短(p＜0.05)。
　　乳腺癌患者血漿中IL-35水平高于健康對(duì)照組，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.24±0.11 ng/ml vs0.23±0.10ng/ml，P=0.544）。但在乳腺癌患者中，Ⅲ期患者血漿IL-35表達(dá)水平顯著高于Ⅰ和Ⅱ期的患者(0.29±0.13ng/ml VS

7、0.22±0.09ng/ml，P=0.024)，腋窩淋巴結(jié)陽(yáng)性患者的血漿IL-35表達(dá)水平顯著高于陰性患者（0.28±0.13 ng/ml VS0.20±0.05ng/ml，P=0.004），但患者血漿IL-35表達(dá)水平與ER、PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67表達(dá)及分級(jí)無(wú)明顯相關(guān)性(p＞0.05)。
　　結(jié)論乳腺癌組織腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中表達(dá)IL-35，高表達(dá)IL-35同多個(gè)預(yù)后不良因素密切相關(guān)，血漿中IL-35表達(dá)同臨

8、床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。IL-35表達(dá)可以作為乳腺癌的不良預(yù)后因子。
　　第二部分 IL-35對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及機(jī)制
　　目的：
　　探討IL-35對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡的影響及其分子機(jī)制。
　　方法：
　　將外源性IL-35加入人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)用MTT法檢測(cè)增殖，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在增殖、凋亡及細(xì)胞周期中的差異。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-PCR(

9、RT-PCR)方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組促增殖相關(guān)分子(cyclin B、cyclin D、cyclin E、cdk2、cdk4)、抑制增殖相關(guān)分子(p15、p18、p21、p27、p53)、促進(jìn)凋亡相關(guān)分子(Fas、FasL、TRAIL、Bax)、抑制凋亡相關(guān)分子(FLIP、Bcl-2、survivin)的表達(dá)水平，比較兩組表達(dá)差異。從轉(zhuǎn)錄水平探討IL-35對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)分子的影響。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)組增殖率較

10、對(duì)照組顯著提高，呈時(shí)間和濃度依賴性，提示IL-35在體外有促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖的作用。與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組S期細(xì)胞的比例升高，濃度為0、2、10、50ng/ml組的S期細(xì)胞比例分別為:27.11％，29.17％，32.76％，34.80％，提示隨著IL-35濃度升高，乳腺癌細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。
　　與對(duì)照組相比，IL-35處理組的細(xì)胞增殖相關(guān)分子cyclin E、cdk2水平上調(diào)，抑制增殖相關(guān)分子p15水平下調(diào)，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

11、(p＜0.05)。IL-35，處理組促進(jìn)凋亡相關(guān)分子Fas、TRAIL水平下調(diào)(p＜0.05)。其他增殖及凋亡相關(guān)分子(cyclin B、cyclin D、cdk4、p18、p21、p27、p53、FasL、Bax、FLIP、Bcl-2、survivin)水平變化實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組無(wú)顯著差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　IL-35可以通過(guò)調(diào)控促增殖相關(guān)分子cyclin E、cdk2上調(diào)、抑制增殖相關(guān)分子p15下調(diào)、促進(jìn)凋亡